Regulation de l'activite et de la synthese des 3 orthodiphenol-o-methyltransferases de tabac au cours de la reaction d'hypersensibilite au vmt

• Auteur / Autrice : Bernard Dumas
• Direction : Bernard Fritig
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

La reaction hypersensible du tabac (nicotiana tabacum var. Samsun nn) au vmt (virus de la mosaique du tabac) conduit a la stimulation des enzymes de la voie des phenylpropanoides qui precede l'accumulation de lignine autour des lesions. Parmi les enzymes de cette voie metabolique nous avons etudie la regulation de l'activite des o-diphenyl-o-methyltransferases (omt) qui catalysent la methylation de composes precurseurs de la lignine comme l'acide cafeique et l'acide 5-hydroxyferulique. Les trois omt du tabac ont ete purifiees a homogeneite grace a la mise au point d'une chromatographie d'affinite. Le processus de purification a ete applique a des feuilles saines ou infectees auxquelles on avait injecte un acide amine radioactif. Une augmentation de la radioactivite specifique des omt a ete observee au cours de l'infection demontrant que c'est l'augmentation de la synthese de novo de chacune des trois proteines qui controle la stimulation de l'activite des omt. L'activite messagere des arn codant pour les omt a ete mesuree, dans les plantes saines ou infectees, par traduction in vitro. Une forte stimulation de l'activite traductionnelle des omt a ete observee lors de la reaction d'hypersensensibilite. Une banque d'adnc a ete construite dans le vecteur d'expression lambda gt11 a partir d'arnm extrait de plantes infectees. Le criblage de la banque avec des anticorps anti-omt a permis d'isoler deux clones. Un fragment de 70pb derivant de l'un de ces deux clones a ete sousclone et sequence