Purification et caracterisation de proteines basiques et thermostables associees au nucleoide de bacillus subtilis

Purification and characterization of heat-stable and acid-soluble proteins from the bacillus subtilis nucleoid

• Auteur / Autrice : VIVIANE SALTI
• Direction : Luisa Hirschbein
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Des proteines de type histone basiques, thermostables et de faible masse moleculaire ont ete isolees chez de nombreux organismes et semblent intervenir dans la compaction de l'adn chez les procaryotes (drlica et rouviere-yaniv, 1987). Dans ce travail nous avons caracterise quatre proteines abondantes, basiques et thermostables associees au nucleotide de bacillus subtilis isole a faible force ionique (0,115 m nacl). Ces proteines de 8,5, 12, 23 et 26 kda presentent une affinite non specifique vis-a-vis d'adns homologues et heterologues. Par ailleurs, une digestion menagee du nucleoide 0,115 m par la nuclease micrococcale libere des fragments de protection de 80 a 120 pb. L'ensemble de ces donnees suggere une participation de ces proteines dans la condensation du chromosome et dans la formation de structures nucleoproteiques de type nucleosome, tres instables a force ionique elevee. Parmi ces proteines nous en avons purifie et caracterise trois: la proteine hpb9 est l'homologue de la proteine hu chez b. Subtilis, elle a ete identifiee par: (1) reaction immunologique croisee avec des anticorps diriges contre les proteines hu d'e. Coli et de b. Globigii; (2) par determination de sa sequence n-amino terminale. De plus cette proteine est capable, en presence de topoisomerase i, d'introduire des supertours negatifs dans des molecules d'adn circulaires relachees. La proteine hpb12 dont l'abondance est estimee a 20000 monomeres par cellule presente une affinite preferentielle pour de l'adn double brin surenroule. Elle se fixe a l'adn de maniere cooperative avec une stchiometrie d'environ un monomere pour 70 pb et form des complexes tres stables avec celui-ci. Un role dans la structure de l'adn est donc suggere. La proteine hpb23 se fixe preferentiellement a de l'adn simple brin, son analogie avec d'autres proteines de type ssb est actuellement recherchee