Contribution a l'etude des cellulases excretees par trichoderma reesei : caracterisation du complexe cellulolytique de la souche cl 847 en vue de ses applications industrielles

Study of the cellulases produced by trichoderma reesei: characterization of the cellulolytic complex of the strain cl 847, for its industrial applications

• Auteur / Autrice : ELISABETH LARBRE
• Direction : Robert Esnault
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Le procede d'hydrolyse enzymatique de la biomasse lignocellulosique est etudie a l'i. F. P. En vue de son application a la production de carburants oxygenes. Les preparations d'enzymes cellulolytiques sont obtenues par fermentation aerobie du champignon trichoderma reesei. Ce travail de these a eu trois objectifs principaux: 1) le choix et la mise en place d'une methode de caracterisation du complexe cellulasique, par une technique a la fois simple et rapide. La methode retenue est la chromatofocalisation. Cette technique a permis en une seule operation, la resolution du mout cellulasique en une huitaine de pics bien distincts; 2) la mise en application de cette methode, d'une part, au suivi des fermentations productrices de cellulases, d'autre part, a l'etude des operations d'hydrolyse; 3) l'etude approfondie des cellobiohydrolases; ces enzymes representent a elles seules, les deux tiers des proteines totales du complexe cellulasique de t. Reesei. Ce travail a consiste pour partie, en une etude de leur mode d'action. Nous avons mis en evidence l'existence d'un phenomene de synergie, entre les endoglucanases et les exoglucanases, d'une part, mais aussi entre les exoglucanases elles-memes. Afin de mieux comprendre ces phenomenes, nous avons cherche a acquerir une meilleure connaissance des caracteristiques physicochimiques d'une enzyme a activite exoglucanase. Pour ce faire un etalon cellobiohydrolase 1 a ete elabore. Apres obtention de l'immunserum anti-c. B. H. 1, nous avons recherche a parfaire la purification de cette enzyme par la technique d'immuno-affinite. Le travail accompli ici, devrait permettre, a moyen terme, la mise au point d'un dosage specifique de l'enzyme, et eventuellement, une analyse des impuretes ou contaminants, et a plus long terme, le sequencage de la proteine et le clonage du gene responsable de sa synthese