Biologie moleculaire des mycobacteries : recherches sur les differents modes de transfert genetique

Molecular biologogy of mycobacteria: studies on distinct mechanisms of genetic transfer

• Auteur / Autrice : RACHID LAZRAQ, Hugo David
• Direction : DOMINIQUE ANXOLABEHERE
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

L'etude de l'expression de genes etrangers au sein des mycobacteries necessite le developpement des techniques de transfert genetique et la construction de vecteurs stables capables de se maintenir et de se repliquer chez ces bacteries. Ainsi, nous avons developpe, et pour la premiere fois, un systeme de transfert genetique par conjugaison entre e. Coli et m. Smegmatis. Ce systeme de transfert, dont l'efficacite a ete relativement importante a ete etendu avec succes a d'autres especes mycobacteriennes. Nous avons construit des vecteurs navettes a base du plasmide pal5000 (plasmides et cosmides). Ces vecteurs ont ete par la suite introduits par electroporation chez differentes especes mycobacteriennes (notamment m. Tuberculosis et m. Aurum). Nous avons constate au cours de cette etude que les vecteurs construits a partir du pal5000 (plasmides et cosmides). Ces vecteurs ont ete par la suite introduits par electroporation chez differentes especes mycobacteriennes (notamment m. Tuberculosis et m. Aurum). Nous avons constate au cours de cette etude que les vecteurs construits a partir du pal5000 etaient relativement instables chez les mycobacteries; ainsi, nous avons clone l'origine de replication du mycobacteriophage d29 et nous avons demontre a la suite de ce clonage que les vecteurs contenant l'origine de replication du phage d29 etaient stables dans m. Smegmatis mc#2155. Nous avons egalement developpe partiellement un systeme de transfert genetique par transduction, base sur l'empaquetage d'adn in vitro. Pour cela, nous avons etudie les caracteristiques physico-chimiques du mycobacteriophage d29 (isolement d'un mutant de detetion nomme f5, determination des proteines de structure et les cadres physiques des phages d29 et f5 et localisation des extremites cohesives). Des essais d'empaguetage in vitro sont en cours de realisation a partir des extraits de mutants thermosensibles de f5 prepares dans cette etude