Isolement et expression fonctionnelle d'une sequence ancestrale codant pour les sites de liaison mu et delta des opioides

Isolation and functional expression of an ancestral sequence encoding for mu and delta opioid binding sites

• Auteur / Autrice : Florence Cabon
• Direction : Paul Cohen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Dans un premier temps, est decrite une methodologie qui permet de detecter la synthese de sites de liaison des opioides apres traduction in vitro d'arnm provenant de tissus exprimant le recepteur. J'ai choisi comme modele la lignee cellulaire ng108-15 qui n'exprime que la classe delta des recepteurs des opioides. Dans ce systeme, j'ai montre que: 1) les arn de ces cellules dirigent in vitro la synthese d'une seule population de sites de liaiso qui presentent une affinite equivalente pour les ligands mu et delta; 2) la taille de la proteine synthetisee est de 51 kda. ; 3) ces sites de liaison sont codes par des arn dont la taille est comprise entre 6 et 8 kbases. J'ai utilise cette methotodologie pour cribler une banque d'adnc construite dans n vecteur d'expression procaryote. Les clones ont ete selectionnes par la capacite des arn correspondants aux insertions clonees a synthetiser in vitro des sites de liaison des opioides. J'ai ainsi isole un clone (opi) codant pour un site de liaison qui presente une affinite equivalente pour les ligands delta (kd=1,9nm) et mu (kd=3,2nm). L'analyse de la sequence nucleotidique de ce clone a montre une homologie complete avec la sequence env-y de e. Coli. J'ai montre sur les bacteries la presence de sites de liaison stereospecifiques pour la #3h dihydromorphine (kd=4,2nm). Par ailleurs, la transfection de opi dans des fibroblastes ou des cellules c6 a permis de mettre en evidence l'expression de sites de liaison de ligands opioides de specificite delta dans les fibroblastes et mu dans les c6. Une analyse par protection a la nuclease s1, effectuee avec un oligonucleotide contenu dans la sequence opi, a montre que cette sequence est partiellement homologue a celle des recepteurs des opioides. Ces resultats suggerent que la sequence opi-env y code pour un site ancestral de liaison des opioides