Isolement et caracterisation physiologique et biochimique de lignees cellulaires de daucus carota l. A potentialites embryogenes differentes

Isolation, physiological and biochemical characterization of daucus carota cell lines differing by their embryogenic potential

• Auteur / Autrice : Pierre Coutos-Thévenot
• Direction : Emile Miginiac
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les suspensions cellulaires embryogenes de daucus carota derivent frequemment et perdent leur capacite embryogene. Cette observation suggere que des cellules embryogenes et des cellules non-embryogenes coexisteraient dans les suspensions cellulaires cultivees en presence de 2,4-d. Une selection en faveur des cellules non competentes entrainerait le phenomene de derive. La presence de ces deux types de cellules dans les suspensions cellulaires a donc ete examinee par clonage d'amas de cellules meristematiques. Quarante lignees cellulaires ont ete ainsi isolees et la distribution de leur potentiel embryogene a ete etudiee. Des clones non embryogenes, faiblement ou hautement embryogenes ont ete selectionnes. L'etablissement de ces lignees cellulaires a potentialites embryogenes tres differentes et stables a fourni un materiel biologique permettant d'avoir une demarche de physiologie et de biochimie comparees. Ce materiel a permis de decrire l'une des etapes cruciales du processus d'embryogenese: la carence auxinique au passage de la phase d'induction a la phase d'expression de l'embryogenese. Le protocole de transfert des cellules de la phase d'induction a la phase d'expression assure une reduction du niveau de 2,4-d par un facteur d'environ 1000. Les souches clonees ont ete comparees quant a l'expression de marqueurs potentiels de la capacite embryogene. La recherche de l'expression d'un gene marqueur de l'embryogenese a ete entreprise en utilisant un cadn specifique isole par thomas et wilde (1987). Cette etude a revele que l'arnm correspondant est fortement exprime seulement chez les cellules embryogenes des la phase d'induction en presence de 2,4-d. L'observation des diagrammes proteiques des cellules a montre que l'intensite d'expression d'une proteine de 28 kd suivait celle de l'arnm precedent