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Thèse soutenue

Reconstitution de systèmes de transport ionique des végétaux dans des vésicules et des membranes planes

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Auteur / Autrice : Nathalie Galtier
Direction : C. GRIGNON
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Physiologie et biologie des organismes et populations
Date : Soutenance en 1990
Etablissement(s) : Montpellier 2

Résumé

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Le plasmalemme de racine de mais a ete purifie par centrifugation sur gradient de densite de saccharose et par partage de phases. L'etude des transports ioniques par le plasmalemme a necessite, d'une part la reconstitution de vesicules actives (ie orientees inside-out) par expositions des vesicules a un detergent non ionique, et d'autre part la maitrise de sondes moleculaires permettant de caracteriser les gradients electrochimiques sur vesicules. L'etude de la reponse d'une sonde optique, l'oxonol-vi, aux potentiels de membrane, a permis de caracteriser l'activite de transport de l'atpase du plasmalemme, et de mettre en evidence les limites de l'utilisation quantitative de ces sondes. La reconstitution de systemes de transport du plasmalemme dans les membranes planes a ete realisee par trois methodes: methode de schindler (apposition de deux monocouches formees par adsorption de vesicules a l'interface eau/air), methode du dip-tip (formation de blm microscopiques a l'extremite d'une pipette de patch) et insertion spontanee de proteines delipidees. L'etude de l'adsorption de differents types de vesicules a l'interface eau/air a mis en evidence la necessite de la fusion des vesicules de plasmalemme avec des liposomes pour optimiser la reconstitution par la methode de schindler. La fusion par cycles de congelation-decongelation a ete etudiee par trois techniques: observation au microscope optique, co-sedimentation des lipides et des proteines sur gradient de densite, et mesure des pressions superficielles des preparations. Les proteoliposomes geants resultant de la fusion ont permis de former des blm contenant des canaux ioniques, soit par la methode de schindler, soit par la methode du dip-tip. Les caracteristiques de ces canaux ioniques sont semblables a celles de canaux reconstitues par insertion spontanee