Le facteur d'initiation IF2 d'E. Coli : origine de la forme beta et domaines fonctionnels de la protéine

par Gilles Vachon

Thèse de doctorat en Biologie moléculaire et cellulaire

Sous la direction de Raymond Julien.

Soutenue en 1990

à Limoges , en partenariat avec Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques (autre partenaire) .

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  • Résumé

    Le facteur d'initiation if2 est present sous deux formes dans la bacterie e. Coli: une forme alpha (890 acides amines) et une forme beta depourvue des 157 premiers residus d'if2alpha. Cette forme tronquee semble resulter, d'apres des travaux anterieurs, d'une initiation interne de la traduction sur l'arnm d'infb. Dans la premiere partie de notre travail, afin de caracteriser ce site d'initiation potentiel, nous avons realise differentes fusions de genes entre le debut d'infb et le gene lacz, depourvu de ses signaux de traduction. L'analyse quantitative et qualitative des proteines hybrides purifiees montrent qu'if2beta provient bien d'une initiation de traduction independante sur le gug#1#5#7 d'infb. De plus, nous avons obtenu, par mutagenese dirigee, un double mutant n'induisant pas la synthese d'if2 beta. Ce mutant d'infb permettra ulterieurement de tester la viabilite des bacteries n'exprimant qu'if2alpha. La deuxieme partie de notre etude a ete consacree aux domaines proteiques susceptibles de constituer if2. En plus du domaine g central deja connu, nous avons mis en evidence une homologie de sequence entre la partie c-terminale du facteur et le represseur ci du phage lambda. Nous avons elabore un protocole de purification de ces domaines base sur leur fusion avec la beta-galactosidase et une proteolyse limitee de la proteine hybride. In vitro, le domaine g isole conserve sa capacite de fixation du gdp mais ne presente plus d'activite d'hydrolyse, du fait probablement de l'absence du domaine de liaison au ribosome. La proteine domaine c-terminal-beta-galactosidase possede une affinite pou l'adn en general. Il n'est pas exclu que ce domaine soit responsable de la reconnaissance du fmet-arn#f#m#e#t et/ou du ribosome et/ou d'une sequence d'adn genomique specifique, comme l'operon ribosomique rrnb

  • Titre traduit

    The initiation factor if2 of e. Coli : origin of the beta form and functional domains of the protein


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  • Annexes : 223 REF

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