Membrane topography of the mitochondrial adp/atp carrier. Immunological and proteolytic study

• Auteur / Autrice : Isabelle Marty
• Direction : Pierre Vignais
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble, Isère, France ; 1971-2015)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre d'études nucléaires (Grenoble ; 1956-2006)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Transport biologique

Mots clés libres

Biologie moleculaire et cellulaire

Anticorps antipeptides synthetiques

Anticorps monoclonaux

Cinetique de transport

Mitochondrie

Proteine membranaire

Proteolyse

Topographie

Transporteur d'adp

Atp

Résumé

Le transporteur mitochondrial d'adenine-nucleotides (transporteur d'adp/atp), proteine membranaire implantee dans la membrane interne des mitochondries, permet l'importation de l'adp cytosolique et l'exportation de l'atp matriciel, nouvellement synthetise dans la mitochondrie. Le travail presente ici a pour objet l'etude de la topographie membranaire du transporteur d'adp/atp, a l'aide de differentes techniques. Une approche immunochimique a tout d'abord ete mise en uvre. Six peptides corespondant a des regions du transporteur supposees extramembranaires ont ete synthetises, et utilises pour produire des anticorps specifiques. La reactivite de ces anticorps varie en fonction du peptide considere et de l'etat de la proteine (proteine fragmentee, isolee en presence de sds, ou dans l'etat membranaire). Aucun des six serums antipeptide obtenus n'est capable de reconnaitre la proteine inseree dans la membrane mitochondriale interne. Une production d'anticorps monoclonaux a egalement ete entreprise. Le seul clone positif qui a pu etre maintenu en culture s'est revele comme etant non specifique du transporteur d'adp/atp. Dans une seconde partie de ce travail, l'etude de la topographie du transporteur a ete conduite grace a la technique de proteolyse menagee. L'utilisation conjointe de proteases specifiques, d'anticorps antipeptides synthetiques et de micro-sequencage des fragments proteolytiques a permis de mettre en evidence trois sites de coupure matriciels. Ces resultats ont conduit a l'etablissement de nouveaux modeles d'implantation de la proteine de transport d'adp/atp dans la membrane mitochondriale. Un autre volet de l'etude du transport d'adp/atp presente ici est la determination de la cinetique de transport d'adp et d'atp dans differentes conditions, realisee a l'aide d'un appareil de filtration rapide