Spécificité de la méthionyl-aminopeptidase : étude systématique in vivo de l'excision de la méthionine amino-terminale des protéines de Escherichia coli

Specificity of the methionyl-aminopeptidase: systematic in vivo study of the excision of the amino-terminal methionine from escherichia coli proteins

• Auteur / Autrice : Philippe-Hervé Hirel
• Direction : Guy Fayat
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Palaiseau, École polytechnique
• Jury : Président / Présidente : Sylvain Blanquet
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : J.-B. Lepecq
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Patrick Stragier, J.-P. Waller

Résumé

Environ 40% des protéines solubles d'escherichia coli ont conserves, sous leur forme mature, leur methionine amino-terminale. D'une analyse informatique des séquences n-terminales de protéines d'e. Coli, nous avons pu induire un modèle enzymatique base sur la reconnaissance de la taille du second acide amine, rendant compte de l'occurrence (ou de la non occurrence) de la maturation, et compatible avec l'existence d'une enzyme unique. Dans le but de valider et préciser notre modèle, nous avons systématiquement modifie, par mutagénèse dirigée, le second codon du gène de la méthionyl-arnt synthétase, fusionne à celui de la beta-galactosidase. Les 20 variants de la protéine hybride ont été purifiés et leur séquence n-terminale déterminée. Les résultats sont en parfait accord avec le modèle propose, et confirment même ses prédictions concernant des acides aminés non encore rencontres en seconde position d'une protéine d'e. Coli. Notre modèle affine prévoit que l'espèce protéique majoritaire correspondra a une excision de la méthionine n-terminale, si et seulement si la longueur de la chaine laterale du second acide amine est inferieure a une valeur seuil comprise entre 2,83 angstroms (cysteine) et 3,68 angstroms (asparagine). Des résultats récents sur la demi-vie des protéines comme fonction de leur acide amine n-terminal suggèrent qu'un rôle possible de la méthionine-aminopeptidase servit a participer au contrôle de la stabilité des protéines. Une autre hypothèse, proposant que la map permette un recyclage de la méthionine servant au démarrage de traduction, est discutée.