Production de pectinases par culture en milieu solide de champignons filamenteux : amelioration genetique d'aspergillus niger et etude des pectinases de trichoderma album

• Auteur / Autrice : HELENE MURRAY PETRICH
• Direction : Jean Boucaud
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Caen

Résumé

La productivite d'une souche d'aspergillus niger (an4) a ete augmentee par mutagenese. Quare cycles de mutagenese se sont succedes. Les agents mutagenes utilises ont ete : cycle i : rayonnement ultraviolet, cycle ii : n-methyl-n-nitro-n-nitrosoguanidine, cycle iii : rayonnement ultraviolet, cycle iv : ethyl-methane-sulfonate. Une premiere selection des souches mutantes hyperproductices de pectine-methylesterase et de polygalacturonase est realisee par un test en milieu gelose faisant intervenir du rouge de ruthenium avec des composes pectiques. Des cultures en milieu solide sur de la pulpe de betterave effectuees a plusieurs echelles ont permis d'affiner la selection. Une souche hyperproductrice de polygalacturonase (d103) a finalement ete retenue, elle produit 4,77 fois plus d'enzyme que la souche an4. La production de polygalacturonase des souches an4 a d103 est reprimee par un apport de glucose dans les milieux de culture. D'autre part, les pectinases produites par trichoderma album en milieu solide ont ete etudiees. Les activites pectinemethylesterases et polygalacturonases ont ete separees par chromatographies successives sur carboxy-methyl-sephadex et hydroxylapatite. La purification de la polygalacturonase a ete poursuivie par chromatographie sur biogel p60. Trois isoformes a activite de type endo-polygalacturonase et quatre isoformes a activite pectinemethylesterase ont ete mise en evidence. Les pectinases de trichoderma album presentent une activite maximale a 50\c dans une zone de ph comprise entre 5 et 5,5. La polygalacturonase est particulierement stable a ph acide. Comparee a d'autres polygalacturonases fongiques, l'enzyme de trichoderma album presente un km vis a vis du polygalacturonate de sodium particulierement faible de 0,085 g. 1 1.