Le moteur de recherche
des thèses françaises
'%3e%3cpath%20style='fill:%2300a0dc;fill-opacity:1;stroke:none;stroke-width:.144606;stroke-opacity:1;stop-color:%23000'%20d='M41.8%20100.088H52.28c.46%200%20.831.421.831.945v10.25c0%20.524-.37.946-.831.946H41.8c-.46%200-.831-.422-.831-.945v-10.251c0-.524.37-.945.831-.945z'/%3e%3cpath%20d='m47.072%20102.02-4.87%202.656%204.87%202.657%203.985-2.174v3.06h.885v-3.543m-7.969%201.851v1.771l3.1%201.691%203.098-1.691v-1.77l-3.099%201.69z'%20style='fill:%23fff;fill-opacity:1;stroke-width:.442726'/%3e%3ccircle%20style='fill:%23009f1d;fill-opacity:1;stroke:%23fff;stroke-width:.379704;stroke-linecap:round;stroke-linejoin:round;stroke-miterlimit:4;stroke-dasharray:none;stroke-opacity:1;stop-color:%23000'%20cx='54.151'%20cy='101.224'%20r='3.451'/%3e%3cpath%20d='m55.669%2099.387.659.664-3.075%203.104-1.634-1.649.66-.663.974.979%202.416-2.435'%20style='fill:%23fff;fill-opacity:1;stroke:none;stroke-width:.30061;stroke-miterlimit:4;stroke-dasharray:none;stroke-opacity:1'/%3e%3c/g%3e%3c/svg%3e)
Étude d'un transport actif secondaire : caractérisation de la purine-cytosine perméase de la membrane plasmique de Saccharomyces Cerevisiae
| Auteur / Autrice : | Maria-Chantal Chirio |
| Direction : | Jean Chevallier |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Biologie |
| Date : | Soutenance en 1990 |
| Etablissement(s) : | Bordeaux 2 |
Résumé
La purine-cytosine perméase est un transporteur secondaire spécifique des bases puriques et de la cytosine, localise dans la membrane plasmique de saccharomyces cerevisiae. Ce transport utilise comme source d'énergie, la différence électrochimique en protons générée par l'atpase plasmique. L’étude biochimique du mécanisme de transport de cette perméase implique sa purification. Ainsi dans le but de repérer le transporteur et le suivre au cours de son isolement, un marquage spécifique de la protéine a été entrepris. Nous disposons pour cette étude de trois souches: une souche sauvage, une souche mutante dont le gène codant pour la perméase a été détecté et une deuxième souche mutante, dans laquelle un plasmide multicopié contenant le gène de la perméase a été clone. Les caractéristiques cinétiques de transport sont déterminées pour ces trois souches. Trois moyens ont été mis au point pour marquer la perméase: la fixation spécifique de ligands, l'utilisation d'anticorps dirigés contre les peptides constitutifs des extrémités n et c terminales, et un marqueur covalent de photoaffinité: la 8-azido-adenine. La 8-azido-adenine est un inhibiteur compétitif de l'activité de transport. Après irradiation, il se fixe de façon covalente sur les cellules et cette fixation entraine une inactivation du transport en relation avec la quantité de réactif fixe. Ainsi par mesure du marquage spécifique de la 8-azido-2#3h-adenine, le nombre de perméases existant dans les cellules et dans les membranes plasmiques a été évalué pour les différentes souches. Puis l'identification et la caractérisation de la perméase ont été entreprises à partir de préparations enrichies en membranes plasmiques. Pour ce faire des techniques électrophorétiques et de permettions de gel en HPLC et de FPLC ont été utilisées. Le polypeptide spécifiquement marque par la 8-azido-adenine et spécifiquement reconnu par les anticorps à une masse moléculaire apparente de 45 KDA en SDS-page