Clonage soustractif d'ADNc. Application à l'étude de gènes induits au cours de la différenciation monocytaire

Subtractive cdna cloning: application to the study of genes induced during monocytic differentiation

• Auteur / Autrice : Myriam Fabre
• Direction : François Amalric
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie moléculaire
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

ADN complémentaire

Différenciation cellulaire

Cytokines

Clonage moléculaire

Mots clés libres

Monocyte

Expression genique

Regulation

Clonage moleculaire

Differenciation

Phenotype

Dna complementaire

Homme

Lignee v937

Monocyte

Gene expression

Regulation(control)

Molecular cloning

Differentiation

Phenotype

Complementary dna

Human

Résumé

La modification du phenotype d'une cellule en reponse a un stimulus implique au niveau moleculaire la variation du taux d'expression de certains genes. Le clonage soustractif des adn complementaires, a partir d'un meme type cellulaire pris dans deux etats phenotypiquement differents, est un moyen efficace d'identifier et de caracteriser les genes dont le niveau d'expression, meme s'il reste faible, varie specifiquement d'un etat a l'autre. L'approche soustractive que nous avons developpee repose sur l'utilisation d'une methode de clonage de type amorce/adaptateur couplee a la soustraction par hybridation en solution et separation sur hydroxylapatite des sequences dont l'expression n'est pas modifiee. Un systeme cellulaire a ete defini pour permettre, d'une part de valider cette strategie par l'intermediaire de marqueurs moleculaires endogenes, d'autre part, de mettre en evidence des genes partiellement impliques dans la differenciation et l'activation du monocyte au cours de la reponse inflammatoire. La lignee monocytaire humaine u 937 a ete utilisee comme systeme modele pour cette etude. En effet, elle represente une source cellulaire homogene, dont l'activation par le phorbol 12-myristate 13-acetate (pma) entraine la differenciation des cellules en macrophages. De plus, certains genes induits de facon transitoire, tels ceux des cytokines et proto-oncogenes, voient leur expression augmenter davantage en presence d'un inhibiteur de la synthese proteique: la cycloheximide. Le clonage soustractif realise a partir de la lignee u 937 non induite et induite au (pma) et a la cycloheximide a permis de construire deux banques et d'isoler, par criblage differentiel, deux sequences humaines nouvelles (pmf#1) et (pmf#2), d'abondance faible, induites specifiquement au cours de la differenciation monocytaire