Le gene fur1 de saccharomyces cerevisiae codant pour l'ump phyrophosphorylase : structure de differents alleles, regulation et importance dans l'utilisation des pyrimidines exogenes

The fur1 gene of saccharomyces cerevisiae encoding ump pyrophosphorylase : structure of different alleles, regulation and importance in the utilization of exogenous pyrimidines

• Auteur / Autrice : LAURENCE KERN
• Direction : François Lacroute
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Chez la levure s. Cerevisiae, le gene fur1 code pour l'ump pyrophosphorylase qui catalyse la transformation de l'uracile en ump dans la voie d'utilisation des pyrimidines exogenes. Ce gene a ete clone et diverses caracteristiques de sa structure ont ete determinees (sequence nucleotidique, taille et demi-vie de l'arn messager, sites d'initiation de la transcription). La transcription du gene fur1 est induite en presence d'un exces d'uracile dans le milieu intracellulaire. Des mesures d'activite umppase in vitro ont montre que l'ump, l'udp, le dctp et le ttp sont des inhibiteurs de l'activite enzymatique. Nous avons clone et sequence trois alleles recessifs et un allele semi-dominant du gene fur1. Pour chacun d'eux, une seule mutation de type faus-sens est responsable du phenotype de resistance au 5-fu. Nous avons egalement remplace in vivo l'allele sauvage du gene fur1 par deux alleles differents deletes in vitro. Les mutations ainsi construites sont recessives. Elles conferent un niveau de resistance au 5-fu identique a celui des mutants ponctuels recessifs mais leur niveau de resistance a la 5-fuine reste inferieur a celui de certains mutants ponctuels. Les donnees enzymatiques obtenues ne permettent pas d'expliquer que l'absence d'une sequence conduit a un phenotype moins marque que certaines modifications de cette sequence. Des experiences de transformation ont montre que l'expression du gene fur3 se semble pas indispensable a la formation d'une umppase fonctionnelle. Le clonage du gene urk1 codant pour une uridine kinase a permis de mettre en evidence l'existence d'une deuxieme enzyme a activite uridine kinase chez s. Cerevisiae