Aldose reductase et aldehyde reductase : purification et quelques proprietes

Aldose reductase and aldehyde reductase: purification and properties

• Auteur / Autrice : PATRICK BARTH
• Direction : Jean-François Biellmann
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

L'aldose reductase (e. C. 1. 1. 1. 21) et l'aldehyde reductase (e. C. 1. 1. 1. 2) sont des enzymes ubiquitaires appartenant a la famille des aldo/ceto-reductases. Ces enzymes monomeriques utilisent le nadph comme cofacteur et catalysent la reduction de nombreux aldehydes aliphatiques ou aromatiques. L'aldose reductase se distingue de l'aldehyde reductase par sa capacite a reduire en outre une grande variete d'aldoses. Toutefois, ces deux enzymes presentent des proprietes physicochimiques extremement voisines, et leurs sequences en acides amines sont fortement homologues. Le role physiologique rempli par les aldo/ceto-reductases dans les conditions normales est contreverse. Dans des conditions d'hyperglycemie par contre, l'aldose reductase est impliquee dans le developpement de certaines complications a long terme du diabete. L'inhibition specifique de l'aldose reductase apparait ainsi comme une approche attractive pour la prevention et le traitement de ces pathologies. Une procedure originale de purification de l'aldose reductase de cristallin de porc a ete developpee et mise en uvre pour la preparation des quantites importantes d'enzyme purifie necessaires a l'etude structurale entreprise au laboratoire. Le protocole de purification a ete adopte pour la preparation d'aldose reductase de muscle de porc ainsi que de l'enzyme huamin (cristallin et muscle). La preparation d'aldehyde reductase de rein de porc a egalement ete realisee; l'etude en parallele de cet enzyme devrait permettre la conception d'inhibiteurs specifiques de l'aldose reductase. Le fractionnement de l'extrait brut a l'aide de polyethyleneglycol 3000, qui permet l'elimination de 95% des proteines contaminantes, constitue l'etape cle de cette preparation