Structure et régulation de l'expression du gène du récepteur de la vitamine B12 chez Escherichia coli

Structure and regulation of expression of the Escherichia Coli gene for vitamine B12 receptor

• Auteur / Autrice : Robert Aufrère
• Direction : Jean Legault-Demare
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Paris 11

Mots clés

Mots clés contrôlés

Clonage moléculaire

Expression génique

Récepteurs

Cyanocobalamine

Escherichia coli

Mots clés libres

Gène BtuB

Résumé

L'entrée de la vitamine B12 dans la bactérie Escherichia coli se fait par un système relativement complexe impliquant au moins 5 gènes. La première étape est la fixation de la vitamine sur un récepteur spécifique situé dans la membrane externe de la bactérie. Cette protéine est le produit du gène btuB situé sur le chromosome d'E. Coli entre l'opéron argECBH à 89 minutes et l'opéron rplKAJLrpoBC à 90 minutes. BtuB est une protéine multifonctionnelle servant également de récepteur spécifique pour le phage BF23, les colicines E et, en collaboration avec le LPS, la colicine A. BtuB présente une très forte affinité pour l'ensemble des analogues cobalamines et en particulier pour la vitamine B12 (cyanocobalamine); son Kd vis-à-vis de celle-ci est compris entre 0,3 et 3 nM suivant le milieu dans lequel se trouve la bactérie. La synthèse de BtuB est réprimée par la vitamine par un facteur de l'ordre de 20. Une fois fixée, la vitamine est transportée vers le cytoplasme par un mécanisme nécessitant de l'énergie et l'activité de la protéine TonB et dans lequel interviennent probablement une protéine périplasmique (BtuE?), 2 protéines situées dans ou à la périphérie de la membrane interne (BtuC et BtuD). Le travail présenté dans cette thèse a pour objets : le clonage moléculaire du gène btuB ; l'établissement de la séquence nucléoUdique de ce gène ; -l'établissement des sites d'initiation de la transcription et de la traduction ; la mise en évidence de l'existence d'un chevauchement transcriptionnel et traductionnel sur le gène btuB et la recherche de la fonction physiologique de la protéine codée par le gène chevauchant ; l'étude de la régulation de l'expression de ce gène par la vitamine B12 ; l'obtention et l'étude de l'expression de mutants dérégulés.