Regulation de la glycose chez escherichia coli : obtention et etude de mutants de la phosphofructokinase 1

Control of glycolysis in escherichia coli: preparation and characterization of mutants of phosphofructokinase 1

• Auteur / Autrice : MARIE-CLAUDE SERRE
• Direction : Daniel Blangy
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La phosphofructokinase 1 (pfk) catalyse la premiere reaction irreversible specifique de la glycolyse. Par mutagenese dirigtee, nous avons delete les 9 ou les 41 derniers acides amines de la pfk. Une deletion des 41 derniers residus empeche le repliement ou l'assemblage de la proteine dans les conditions intracellulaires. Une deletion des 9 derniers acides amines permet d'obtenir une proteine active in vivo. Les proprietes de cette proteine montrent que la region c-terminale est impliquee dans la fixation des effecteurs mais pas dans la transmission des effets homotropes. Le remplacement du residu leu 178 par un trp entraine la perte des effets heterotropes, bien que la pfk modifiee soit toujours capable de fixer ses effecteurs. Un tel decouplage des effets homotropes et heterotropes nous a conduit a une interpretation plus generale des proprietes allosteriques de la pfk. Nous avons aussi purifie et etudie la mannitol-1-phosphate deshydrogenase, qui permet au mannitol d'entrer dans la glycolyse, ce qui nous a permis d'etablir que la croissance sur mannitol comme seule source de carbone etait un critere de selection fiable pour distinguer les souches pfk#+ des souches pfk#