La detection de sequences d'adn du virus de l'hepatite b dans le serum : les nouvelles approches du diagnostic par hybriditaion moleculaire

Detection of hepatitis b virus dna sequences in serum: new approaches in diagnosis by molecular hybridization

• Auteur / Autrice : Daniel Larzul
• Direction : Daniel Blangy
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Le marquage chimique d'un adn clone par l'acetylaminofluorene (aaf) nous a permis de construire une sonde non radioactive specifique du virus de l'hepatite b (vhb) et de l'utiliser pour detecter des sequences virales dans le serum d'un individu infecte. Le pouvoir d'investigation de ce test a ete demontre sur 228 individus parmi lesquels une dissociation entre la situation ag-hbe/anti-hbe et la replication virale a parfois ete observee. Cependant, que l'on utilise une sonde marquee au #3#2p ou a l'aaf un gain en sensibilite, d'un facteur 10#3 a 3. 10#4 respectivement, etait necessaire pour detecter un serum infectieux contenant 10#2 particules virales par ml. Nous avons ainsi developpe un test non radioactif capable d'assurer la detection d'une seule sequence d'adn viral dans un echantillon teste. Ce test base sur une amplification enzymatique in vitro (pcr) de l'adn viral est cependant limite par differents parametres lies a la pcr: les cinetiques, la reproductibilite et la specificite de la pcr. Une technique derive de la pcr mais n'utilisant que deux etapes thermiques par cycle d'amplification a ete mise au point dans le but d'augmenter la specificite et la rapidite du test. Cette technique mieux adpatee au diagnostic permet en particulier de reduire l'amplitude thermique d'un cycle d'amplification a 16#oc tout en conservant les performances de la pcr. Nous avons concu un appareillage avec lequel 40 cycles d'amplification peuvent etre realises automatiquement en 105 minutes