Contribution a l'etude des enzymes amylolytiques de l'orge et du riz

A study on amylolytic enzymes from barley and rice

• Auteur / Autrice : FREDERIC KERHARDY
• Direction : Jean Dausset
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Cette etude a eu pour objectif d'ameliorer les connaissances relatives aux amylases d'orge et de riz. La chromatographie d'immunoaffinite, utilisee avec des conditions douces de desorption, a ete employee pour la purification des iso-alpha-amylases de l'orge, avec un haut degre de purete. Certaines limites ont cependant ete rencontrees quant a la stabilite enzymatique ou le rendement. Limmunoelectrophorese preparative a permis la purification des iso-alpha-amylases de l'orge et du riz dont on a pu determiner les tailles moleculaires. Cette technique de purification donne de moins bons resultats que la chromatographie d'immunoaffinite quant a la quantite d'antigene recupere, mais permet en revanche l'emploi d'immunserums polyspecifiques. Partant d'une methode de dosage de type elisa, il a ete mis au point une technique permettant le dosage direct d'activites enzymatiques en plaques de microtitration. La methode a ete testee avec le modele de la beta-amylase d'orge. L'etude du systeme iso-alpha-amylase de riz a montre qu'il comportait trois antigenes distincts correspondant a quatre isoenzymes. Les tailles moleculaires des differentes isoformes sont toutes tres voisines et tres proches de celles des isoenzymes du systeme iso-alpha-amylase de l'orge. Il a ete mis en evidence une inductibilite de la production de toutes les alpha-amylases par l'acide gibberellique, aussi bien par la couche a aleurone que par le scutellum. Le groupe majeur alpha-amylase a b a ete purifie pour la preparation d'un immunserum