Apport de la chromatographie liquide haute performance a l'etude du recepteur des hormones glucocorticoides

Application of high performance liquid chromatography to the analysis of glucocorticoid receptor

• Auteur / Autrice : Marc Denis
• Direction : LUSTEMBERGER
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Nantes

Résumé

Les hormones glucocorticoides agissent par l'intermediaire d'une proteine soluble, presente a l'interieur des cellules cibles, appelee recepteur. Ce recepteur est present dans les cellules sous une forme non-transformee, composee d'une unite liant l'hormone et d'un dimere de la proteine de choc thermique hsp90. Apres liaison de l'hormone, les hsp90 dissocient du complexe, et la proteine liant l'hormone acquiert sa capacite a lier l'adn. L'utilisation de la chromatographie liquide haute performance (clhp) en echange d'ions nous a permis de separer les deux formes (transformee et non-transformee) du recepteur, et de montrer que cette technique peut etre utilisee a des fins analytiques, pour l'etude du mecanisme de transformation du recepteur. La clhp d'echange d'ions a egalement des applications preparatives interessantes. Le recepteur peut etre purifie 70 fois en moins de 45 minutes sous sa forme non-transformee, et plus de 10000 fois en 90 minutes sous sa forme transformee. Par combinaison d'une etape d'echange d'ions et de gel filtration en clhp, la proteine hsp 90 peut etre purifiee a l'homogeneite et avec un rendement eleve. En conclusion, ces resultats indiquent que la clhp est une technique de choix dans l'etude du phenomene de transformation, et du mecanisme d'action des hormones glucocorticoides au niveau cellulaire