Recherche Avancée

Thèse soutenue

Stabilisation et dénaturation d'enzymes en présence d'additifs

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Auteur / Autrice : Wei-Nong Ye
Direction : Gilbert Durand
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie
Date : Soutenance en 1989
Etablissement(s) : Toulouse, INSA

Résumé

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La denaturation de la glucose oxydase a ete etudiee en presence de differents additifs (polyols, polyethylene glycols et sels). Un effet stabilisant a ete mis en evidence dans le cas des polyols: le xylitol (3,0 m) permet de multiplier le temps de demi-vie (t#1#/#2) de l'enzyme par un facteur 40. Cet effet ne depend pas seulement du nombre de groupements hydroxyles, de l'isomerie ou de la concentration des additifs, mais aussi de celle de l'enzyme. La structuration du solvant peut intervenir directement sur la reorganisation de la structure quaternaire de la glucose oxydase (par une redistribution de ses sous-unites) et ainsi modifier sa resistance a la chaleur. Les groupements -sh participent a la stabilisation de l'enzyme, et nous avons etabli que la dissociation entre le fad et l'enzyme n'etait pas, a 60#oc, un facteur determinant dans la perte d'activite de la glucose oxydase. Ces resultats ont ete utilises pour rendre possible la fabrication et l'utilisation d'une electrode specifique de dosage du glucose. Le lysozyme est stabilise par l'ajout de polyols ou de sels (son t#1#/#2 est multiplie par 15 par du sorbitol 4,0 m). L'effet de ces additifs ou la structuration du milieu ne sont pas des effets absolus et les resultats obtenus dans le cas de la glucose oxydase ne sont pas retrouves. La nature des enzymes (glucose oxydase, lysozyme et invertase) est caracterisee par leur balance hydrophile/hydrophobe. Plus une enzyme est de nature hydrophile, plus sa stabilite naturelle est faible, mais plus l'effet protecteur lie a la presence d'additifs est fort