Contribution à l'étude de la production et de la résolution d'un hydrolysat d'hémoglobine bovine : applications

Contribution to the study of production and of resolution of a bovine haemoglobin hydrolysate : applications

• Auteur / Autrice : Jean-Marie Piot
• Direction : Daniel Thomas
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génie Enzymatique, Bioconversion et Microbiologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Compiègne
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences pour l'ingénieur (Compiègne)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Hémoglobine

Tests enzymatiques en clinique

Hydrolysats de protéines

Peptides

Ultrafiltration

Chromatographie en phase liquide à hautes performances

Spectrométrie de masse

Chromatographie sur gel

Alumine

Magnésie

Mots clés libres

Hydrolysat enzymatique

Résumé

Ce travail, présenté sous la forme de publications, concerne, l'étude de la production et de la résolution d'un hydrolysat enzymatique d'hémoglobine bovine. La première partie décrit la préparation en batch d'un hydrolysat pepsique décoloré en utilisant soit de l'alumine, soit de la magnésie. Ensuite une production en continu, au stade pilote, d'un hydrolysat pepsique incolore et reproductible a été mise au point. L'hydrolyse enzymatique de l'hémoglobine est réalisée dans un réacteur à ultrafiltration équipé de membranes minérales. La reproductibilité de l'hydrolysat ainsi produit a été démontrée. La seconde partie du travail concerne l'étude analytique de l'hydrolysat peptidique. Des méthodes chromatographiques associant dans un premier temps la basse pression et la HPLC, puis, utilisant la HPLC seule, ont été mises en œuvre pour résoudre ces hydrolysats complexes. Ces méthodes ont permis d'obtenir des peptides purs. La spectrométrie de masse (FAB) et l'analyse d'amino-acides ont été ensuite utilisées pour caractériser et identifier n'importe quel peptide ainsi purifié. Enfin, un exemple d'application de l'hydrolysat, dans le domaine de la réalisation de milieux de culture pour la recherche, a été présenté.

This work, presented in publications form, concerns the study of production and resolution of an enzymatic hydrolysate from bovine haemoglobin. The first part describes the batch preparation of a peptic decolorized hydrolysate using either alumina or magnesia. Then a continuous production, at the pilot-plant scale, of a reproductible and decolorized peptic hydrolysate was perfected. Enzymatic hydrolysis of haemoglobin was performed in an ultrafiltration reactor equipped with mineral membranes. The reproductibility of the hydrolysate was demonstrated. The second part of this work concerns the analytical study of the peptidic hydrolysate. Chromatographic methods, first associating low pressure and HPLC, and then using HPLC alone, were performed in order to resolve these complex hydrolysates. These methods allowed us to obtain pure peptides. Mass spectrometry (FAB) and amino acid analysis were then performed in order to characterise and identify any purified peptide. Finally, an application of the hydrolysate, in the area of culture media for research, was presented.