Synthèse de L-valine, L-lencine, et L-alanine par amination réductrice avec des enzymes à cofacteur régénérable : de la synthèse enzymatique à la bioconversion

L-valine, l-leucine and l-analine synthesis by reductive amination with cofactor-dependent enzymes. From enzymatic synthesis to bioconversion

• Auteur / Autrice : Andrée Honorat-Pascal
• Direction : Jacques C. Baratti
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et microbiologie
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 1

Résumé

Les syntheses de l-alanine, de l-leucine et de l-valine a partir des cetoacides correspondants et utilisant la glucose deshydrogenase pour la regeneration du nadh, ont ete realisees en mettant en uvre des systemes enzymatiques provenant d'une seule origine, bacillus megaterium atcc 39118. Ce mutant est capable de produire simultanement l'alanine deshydrogenase, la valine deshydrogenase et la glucose deshydrogenase. Un procede de separation et de purification de ces trois enzymes, consistant en un traitement thermique suivi d'une chromatographie d'echange d'ions, a ete mis au point. Les principales caracteristiques des enzymes purifiees ont ete determinees de facon a definir les meilleures conditions de conversion enzymatique. Une etude plus detaillee a ete menee sur la synthese en discontinu de l-valine a partir de cetoisovalerate. Elle a consiste a comparer systematiquement les performances des differents systemes pouvant etre mis en uvre: les enzymes libres, purifiees ou non, et les cellules intactes ou permeabilisees. Les meilleurs resultats sont obtenus avec les enzymes purifiees. De bons rendements sont egalement observes avec les cellules permeabilisees qui presentent en outre l'avantage d'une preparation particulierement simple. Les essais de synthese de l-leucine et de l-alanine ont confirme l'interet de la purification des deshydrogenases, qui permet d'eliminer une part des reactions parasites