Obtention et culture de protoplastes de Sequoia sempervirens (D. Don. ) Endl. Et Sequoiadendron giganteum (Lindl. ) Buchholz

Obtention and culture of protoplasts of Sequoia sempervirens (D. Don. ) Endl. And Sequoiadendron giganteum (Lindl. ) Buchholz

• Auteur / Autrice : Patricia Charrier
• Direction : Yvette Dattée
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1988
• Etablissement(s) : Paris 11
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Paris-Sud. Faculté des sciences d'Orsay (Essonne)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Multiplication in vitro

Protoplastes végétaux

Séquoias

Mots clés libres

Sequoiadendron giganteum

Sequoiadendron sempervirens

Suspensions cellulaires

Résumé

L'objectif de ce travail fut l'obtention et la culture de protoplastes chez Sequoia sempervirens et Sequoiadendron giganteum, en étudiant deux origines de matériel : apex de tiges cultivées in vitro et germinations. Nous avons essayé de définir les facteurs favorables à l'obtention d'un rendement suffisant en protoplastes soit par prétraitement du matériel végétal (prétraitement des plants à l'obscurité, préplasmolyse des tissus), soit par l'étude la solution de digestion de la paroi cellulaire (composition enzymatique, ajout de stigmasterol), soit par l'étude de l'âge du matériel végétal. Nous avons pu ainsi mettre en évidence l'existence de facteurs non contrôlés influençant grandement les expérimentations et masquant l'effet éventuel des traitements effectués. D'autre part, nous avons tenté la culture de ces protoplastes afin d'obtenir des divisions cellulaires et la formation de microcolonies en étudiant la densité d'ensemencement, les milieux de culture, les équilibres hormonaux et l'effet éventuellement stimulateur d'une coculture des protoplastes avec une aliquote de suspension cellulaire. La densité de 5 10+4 protoplastes. Ml-1, le milieu de culture de KAO et MYCHAYLUK (1975) et l'équilibre hormonal ANA 8,1 uM. BAP 2,2 uM, KIN 2,4 uM, 2,4D 2,3 uM se sont révélés favorables à la survie des protoplastes, alors qu'une coculture avec une aliquote de suspension cellulaire ne semble pas influencer ce facteur. Nous avons pu obtenir pour chaque espèce et pour chaque origine de matériel végétal, des microcolonies survivant jusqu'à des stades 6 cellules pour celles dérivées de germinations, et 30 cellules pour celles dérivées d'apex de tiges.

The aim of this work has been to obtain and culture protopasts in Sequoia sempervirens and sequoiadendron giganteum. Two origins were studied: in vitro cultured stem apices and germinations. We tried to define the favourable factors for a sufficient protoplasts yield either by pretreatment of the plant material (plant pretreatment in darkness, tissue preplasmolysis), by the solution for cell wall digestion (enzyme composition, stigmasterol addition) or by the age of the plant material. Thus, we could show the existence of non-controlled factors largely influencing the experimentation and overlapping the probable effect of the realized treatments. On the other hand, we tried the culture of these protoplasts to obtain cell divisions and microcolony formation in observing the culture density, the culture media, the hormone level and the probably stimulating effect of a protoplast co-culture with a cell suspension aliquot. The density of 5 10+4 protoplasts. Ml-1, the KAO and MYCHAYLUK (1975) culture medium and the hormone level of 8,1 uM NAA, 2,2 uM BAP, 2,4 uM KIN, 2,3 uM 2,4-D proved favourable for protoplasts survival, though a co-culture with cell suspension aliquot does not seem to influence this factor. For each species and for each origin of the plant material we obtained microcolonies surviving up to 6 cell stage for those derived from germinations and up to 30 cell stage for those derived from stem apices.