Regeneration enzymatique du cofacteur nadh : application a la synthese de l-carnitine

Enzymatic nadh regeneration : application to the synthesis of l-carnitine

• Auteur / Autrice : Sylvie Llopart
• Direction : Pierre Monsan
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie
• Date : Soutenance en 1986
• Etablissement(s) : Toulouse, INSA

Mots clés

Mots clés libres

Biotechnologie, biodeterioration

Bacterie

Hydrogen dehydrogenase

Lcaligenes eutrophus

Enzyme

Nadh

Cofacteur

Regeneration

Carnitine

Stereoisomere l

Synthese enzymatique

Biotransformation

Nad derive macromoleculaire

Résumé

L'hydrogenase cytoplasmique d'alcaligenes eutrophus h16 (ec 1. 12. 1. 2) est utilisee pour regenerer le cofacteur nadh. Une etude de la stabilite de cette enzyme met en evidence sa rapide denaturation en presence d'agents reducteurs, ou de nadh. Paradoxalement, l'oxygene agissant comme stabilisateur de l'enzyme, semble etre tres nefaste lors de la reaction en milieu reducteur. On constate une degradation du cofacteur lors de la mise en oeuvre d'un reacteur en absence d'oxygene, en vue de la production de l-lactate avec l'hydrogenase et la l-lactate deshydrogenase (ec 1. 1. 1. 27) coimmobilisees sur des rafles de mais. L'application a la synthese de l-carnitine, a l'aide de la carnitine deshydrogenase (ec 1. 1. 1. 108) est envisagee. Un taux de recyclage de 270 est atteint au bout de 23 h. La degradation du cofacteur dans le milieu reactionnel peut etre ralentie par l'utilisation d'un derive macromoleculaire hydrosoluble, le n**(6)-(6-aminohexyl)-carbamoyl methyl-nad**(+) greffe sur de l'acide poly-l-glutamique. Une decarboxylation spontanee du substrat en milieu basique, la 3-dehydrocarnitine, impose un rendement de bioconversion de 100 %, qui a ete atteint pendant 24 h avec des ajouts reguliers d'hydrogenase.