Le récepteur des glucocorticoides du cytosol de foie de lapin : structure macromoléculaire et transformation du complexe hormone-récepteur

The glucocorticoid receptor from rabbit liber cytosol : Macromolecular structure and transformation of the hormone-receptor complex

• Auteur / Autrice : Philippe Blanchardie
• Direction : Claude Cassagne
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences
• Date : Soutenance en 1986
• Etablissement(s) : Bordeaux 2

Résumé

Ce travail s'inscrit dans le cadre de l'étude du mécanisme moléculaire d'action des glucocorticoïdes. À partir du foie de lapin surrénalectomisé, le récepteur des glucocorticoïdes peut être obtenu dans la fraction soluble de l'homogénat. L'inclusion d'un agent stabilisateur tel que le molybdate qui bloque l'étape de transformation du complexe ligand-récepteur nous a permis d'étudier son effet sur l'interaction dexaméthasone-récepteur. L'oxyanion augmente la constante de vitesse d'association du ligand et cet effet n'est pas observé en présence d'une force ionique équivalente. L'étude cinétique comparée de l'interaction en l'absence et en présence de concentrations croissantes de molybdate est en faveur d'une interaction directe de l'oxyanion avec la protéine réceptrice. L'utilisation de lectines possédant un spectre d'affinité relativement varié nous a permis de montrer que seules les lectines d'U. Europeus et de L. Culinaris inhibent la liaison spécifique du ligand au récepteur. L'inhibition est fonction de la concentration des lectines et s'avère consécutive à une diminution de la constante d'équilibre d'association. La détermination des paramètres moléculaires montre que le complexe dexaméthasone-récepteur stabilisé par le molybdate, est similaire aux autres récepteurs des glucocorticoïdes. En l'absence de molybdate, les complexes cytosoliques sont transformables grâce à l'élévation simultanée de la force ionique et de la température mais à des taux inférieurs à ceux observés sur le cytosol du foie de rat. Les résultats obtenus concernant la transformation sont compatibles avec l'hypothèse d'une dissociation des sous-unités du complexe non transformé. Les deux espèces moléculaires se lient à l'héparine immobilisée et peuvent être séparées grâce à une élution par augmentation de la force ionique. La chromatographie sur héparine agarose permet en outre de quantifier la transformation et aboutit à des estimations comparables aux méthodes traditionnelles. L'utilisation de préparations hautement purifiées en complexe hormone-récepteur a permis de montrer que ce dernier demeure apte à être transformé, après élimination du molybdate, sans l'intervention de facteurs cytosoliques. Ce résultat permet d'invoquer l'existence d'une interaction de l'oxyanion avec le récepteur des glucocorticoïdes.