Etude des interactions lipase-lipides au niveau d'interfaces modèles
Auteur / Autrice : | Anais Benarouche |
Direction : | Jean-François Cavalier, Frédéric Carrière |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences chimiques |
Date : | Soutenance le 17/12/2013 |
Etablissement(s) : | Aix-Marseille |
Ecole(s) doctorale(s) : | Ecole èdoctorale Sciences Chimiques (Marseille ; 1996-....) |
Jury : | Président / Présidente : Brigitte Gontero-Meunier |
Examinateurs / Examinatrices : Frédéric Carrière, Agnès Girard-Egrot | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Véronique Vié, Stéphane Ransac |
Mots clés
Résumé
Les enzymes lipolytiques sont solubles en phase aqueuse mais hydrolysent des substrats insolubles. Leurs activités lipolytiques dépendent donc fortement de l’organisation des substrats lipidiques présents sous forme de structures interfaciales telles que des émulsions, des micelles, des liposomes, ou des bicouches lipidiques. Les propriétés cinétiques et la spécificité de substrat de ces enzymes résultent de l’étape initiale d’adsorption à l’interface lipide-eau et des interactions entre le substrat et le site actif. Dans le cadre de ce travail de thèse, la technique des films monomoléculaires a été utilisée pour étudier en détail les étapes séquentielles d’adsorption, de catalyse et d’inhibition de l’enzyme à l’interface lipide-eau. Dans une première partie, nous avons réalisé la caractérisation physico-chimique de la lipase gastrique de chien (DGL), avec l’étude : de son adsorption sur un film non substrat de dilauroylphosphatidylcholine ; ‚ de l’hydrolyse interfaciale de la 1,2-dicaprine dans des films mixtes en présence d’Orlistat. Concernant l’étape de catalyse, nous avons étudié l’effet du propeptide sur la spécificité de substrat et l’activité interfaciale de la phospholipase A2 sécrétée de groupe X de souris. Enfin, dans une troisième partie, nous avons comparé les propriétés interfaciales de la lipase YLLIP2 de la levure Yarrowia lipolytica qui serait un bon candidat pour l’enzymothérapie de substitution chez les patients atteints d’insuffisance pancréatique exocrine (IPE), la lipase pancréatique humaine et la DGL. Nos résultats ont confirmé le rôle d’YLLIP2 en tant qu’excellent « substitut » non seulement de la HPL en cas d’IPE, mais aussi de la DGL.