Analyse d'une protéine ciblée par immunoaffinité et digestion sur microréacteur enzimatique couplés en ligne à une analyse par chromatographie liquide et spectrométrie de masse : synthèse, caractérisation et miniaturisation des outils bioanalytiques

Analysis of a target protein by immunoaffinity and digestion on enzymatic microreactor on-line coupled with analysis by liquid phase chromatography and mass spectrometry : synthesis, characterization and miniaturization of bioanalytical tools

• Auteur / Autrice : Annabelle Cingöz
• Direction : Valérie Pichon-Comparot
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie analytique
• Date : Soutenance en 2009
• Etablissement(s) : Paris 6

Mots clés

Mots clés libres

Enzymes immobilisées

Analyse en ligne

Analyse de protéines

Immunoextraction

Lc-ms

Pepsine

Résumé

L’étude de protéines ciblées comme des biomarqueurs dans des matrices biologiques est un réel défi pour le diagnostic médical. De nos jours, la technique de choix est la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. Cependant, l’analyse d’une protéine induit une étape de traitement d’échantillon afin de purifier au mieux la matrice biologique. En vue d’une automatisation totale de l'analyse, une étape d'extraction sélective a été couplée à un réacteur enzymatique suivie de l’analyse par CPL-SM. Tout d’abord, différents réacteurs enzymatiques ont été préparés et évalués. Puis, une étape extraction a été développée via un immunoadsorbant (IS). L’IS a ensuite été couplé à l’analyse pour une application à un échantillon de plasma dopé. Enfin, un des défis analytiques actuels est la miniaturisation du système analytique afin d’augmenter la sensibilité. Ainsi, un réacteur enzymatique a été préparé dans en format capillaire. L’efficacité de digestion a été démontrée sur un substrat de faible poids moléculaire. La synthèse d’un IS miniaturisé sera envisagée dans le but d’un couplage avec le réacteur enzymatique et l’analyse par nano-CPL/SM.