Détection, caractérisation et mesure d'un nouveau dommage radio-induit de l'ADN isolé cellulaire

par Peggy Regulus

Thèse de doctorat en Chimie - Biologie

Sous la direction de Jean-Luc Ravanat.

Soutenue en 2006

à Grenoble 1 .


  • Résumé

    L'acide desoxyribonucleique (adn) est porteur de l'information genetique et les consequences biologiques des lesions survenant sur cette molecule peuvent et re importantes. Nous avons utilise la chromatographie liquide haute performance couplee a la spectrometrie de masse en mode tandem (clhp/sm-sm) pour mettre en evidence la formation de nouvelles lesions radio-induites de l'adn. L'analyse par clhp/sm-sm en mode« perte de neutre» utilise la perte de 116 unites de masse, specifique de la fragmentation de la majorite des nucleosides. Ainsi, 4 nouvelles lesions radio-induites, dont la formation est proportionnelle a la dose d'irradiation, ont ete detectees dans l'adn isole. L'une d'elles, la dcyd341 est de plus formee dans l'adn cellulaire. Il s'agit d'une modification de la 2'desoxycytidine (dcyd) ayant un poids moleculaire de 341 uma. La synthese chimique de ce nucleoside modifie nous a permis de le caracteriser par resonance magnetique nucleaire (rmn) et de determiner sa masse exacte. Un mecanisme de formation a ete propose, dans lequel l'evenement initiateur est l'arrachement de l'atome d'hydrogene en position 4 du 2-desoxyribose (dr) generant un intermediaire aldehydique capable de reagir sur une cytosine voisine. La dcyd341 peut etre consideree comme un dommage complexe, sa formation impliquant une cassure de la chaine d'adn et un pontage entre un produit de modification du dr et une dcyd voisine. En plus de sa caracterisation, de premieres etudes biologiques portant sur la reparation de la dcyd341 ont revele que la lesion est excisee de l'adn avec une certaine efficacite.

  • Titre traduit

    Detection, characterization and measure of a new radiation-induced damage in isolated and cellular DNA


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    DEOXYRIBONUCLEIC ACID (DNA) CONTAINS THE GENETIC INFORMATION AND CHEMICAL INJURY TO THIS MACROMOLECULE MAY HAVE SEVERE BIOLOGICAL CONSEQUENCES. WE REPORT HERE THE DETECTION OF 4 NEW RADIATION-INDUCED DNA LESIONS BY USING A HIGH-PERFORMANCE LlQUID CHROMATOGRAPHY COUPLED TO TANDEM MASS SPECTROMETRY (HPLC-MS/MS) APPROACH. FOR THAT PURPOSE, THE CHARACTERISTIC FRAGMENTATION OF MOST 2'-DEOXYRIBONUCLEOSIDES, THE LOSS OF 116 DA CORRESPONDING TO THE LOSS OF THE 2-DEOXYRIBOSE MOIETY, WAS USED lN THE SO-CALLED NEUTRAL LOSS MODE OF THE HPLC-MS/MS. ONE OF THE NEWLY DETECTED LESIONS, NAMED DCYD341 BECAUSE IT IS A 2'DEOXYCYTIDINE MODIFICATION EXHIBITING A MOLECULAR WEIGHT OF 341 DA, WAS ALSO DETECTED lN CELLULAR DNA. CHARACTERIZATION OF THIS MODIFIED NUCLEOSIDE WAS PERFORMED USING NMR AND EXACT MASS DETERMINATION OF THE PRODUCT OBTAINED BY CHEMICAL SYNTHESIS. A MECHANISM OF FORMATION WAS THEN PROPOSED, lN WHICH THE FIRST EVENT IS THE H-ABSTRACTION AT THE C4 POSITION OF A 2-DEOXYRIBOSE MOIETY. THEN, THE SUGAR MODIFICATION PRODUCED EXHIBITS A REACTIVE ALDEHYDE THAT, THROUGH REACTION WITH A VICINAL CYTOSINE BASE, GIVES RISE TO DCYD341. DCYD341 COULD BE CONSIDERED AS A COMPLEX DAMAGE SINCE ITS FORMATION INVOLVES A DNA STRAND BREAK AND A CROSS-LiNK BETWEEN A DAMAGED SUGAR RESIDUE AND A VICINAL CYTOSINE BASE LOCATED MOST PROBABLY ON THE COMPLEMENTARY DNA STRAND. LN ADDITION TO ITS CHARACTERIZATION, PRELIMINARY BIOLOGICAL STUDIES REVEALED THAT CELLS ARE ABLE TO REMOVE THE LESION FROM DNA. REPAIR STUDIES HAVE REVEALED THE ABILITY OF CELLS TO EXCISE THE LESION. IDENTIFICATION OF THE REPAIR SYSTEMS INVOLVED COULD REPRESENT AN INTERESTING CHALLENGE.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (192 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 167-180

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire Joseph-Fourier.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : TS06/GRE1/0181
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  • Cote : TS06/GRE1/0181/D
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