Etudes structurales des recepteurs nucleaires des retinoides : rxr et rar par diffusion aux petits angles et cristallographie des rayons x

• Auteur / Autrice : PASCAL EGEA
• Direction : Dino Moras
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

Les recepteurs des retinoides rar et rxr sont des facteurs de transcription transduisant les effets pleiotropes des stereoisomeres 9-cis et tout-trans de l'acide retinoique. Les rar lient les deux isomeres alors que le rxr lie exclusivement le 9-cis. Nous avons resolu la structure cristallographique a 2. 5a de resolution du domaine de liaison du ligand du rxr1 humain complexe a son agoniste naturel ; cette structure revele les bases moleculaires de la selectivite entre recepteur et ligand. Dans le cristal le recepteur est sous forme monomerique adoptant une conformation canonique agoniste sans aucun contact direct etabli entre le ligand et l'helice h12 de transactivation. La comparaison avec la structure apo du rxr permet de decrire les changements conformationnels induits par le ligand et generant l'interface proteique fonctionnelle d'interaction recepteur/coactivateur. Cette structure permet de postuler l'existence d'une conformation agoniste commune a tout recepteur nucleaire. Les conformations en solution du rxr du rar et des heterodimeres rxr/rar ont ete etudiees par diffusion centrale des rayons x et des neutrons. Les conformations cristallographiques apo et holo des rxr et rar sont en accord avec celles observees en solution. La fixation du ligand provoque un compactage du domaine d'amplitude similaire a celle observee dans les structures cristallographiques. En solution le holo-rxr est un homodimere. Les heterodimeres rxr/rar sous trois etats distincts de saturation par les deux ligands naturels ont ete caracterises en solution ; la fixation selective des ligands sur les sous-unites induit un compactage progressif de l'heterodimere. La conformation en solution est en accord avec le mode d'association heterodimerique observe dans une structure cristallographique. Nous avons purifie deux complexes adn-proteine correspondants aux deux fragments multidomaines ab et de du rxr. Ces complexes adn-recepteur sont utilises dans des essais de cristallisation.