Gain de sensibilite en spectrometrie de masse des biomolecules utilisation de l'ionisation electrospray et de la desorption laser assistee par matrice pour la caracterisation de proteines et de modifications post-traductionnelles

Sensitivity optimization in mass spectrometry of biomolecules use of electrospray and of matrix assisted laser desorption/ionization for the characterization of proteins and of posttranslational modifications

• Auteur / Autrice : DAMARYS LOEW
• Direction : Alain Van Dorsselaer
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

La spectrometrie de masse est aujourd'hui devenue une technique incontournable pour la recherche en biochimie. Elle a connu ces dix dernieres annees, un essor considerable dans la caracterisation des biomolecules et en particulier dans l'analyse des peptides et des proteines. Ce travail de these a ete oriente simultanement dans deux directions. Nous avons d'une part progresse dans l'utilisation de la spectrometrie de masse pour obtenir des donnees structurales, principalement en focalisant sur l'amelioration de la methode pour atteindre le domaine sub-picomolaire. Nous avons ameliore : - la sensibilite en nanoes-ms a l'aide d'un banc d'essai permettant l'evaluation du capillaire. - la precision de la mesure de masse en maldi-ms grace a une preparation de l'echantillon adaptee. Nous avons d'autre part, releve le defi qui consistait a resoudre des problemes de caracterisation poses par les biochimistes aux spectrometristes de masse, apres epuisement de toutes les autres possibilites des analyses classiques (rmn, degradation d'edman, composition en acides amines, gel d'electrophorese). Grace au gain de sensibilite et a l'amelioration de la precision de la mesure de masse, nous avons pu aborde l'etude de problemes biologiques reels et ainsi caracteriser : - la premiere toxine de scorpion glycosylee, - un peptide antibacterien de crevette panaeus vannamei, - une nouvelle modification post-traductionnelle de la schistosoma mansoni p28. Nous avons d'autre part : - identifie la kininogene humaine, proteine responsable de l'immunogenicite de lots de facteur viii. Cette etude s'inscrit dans le cadre general du projet proteome, - localise un peptide modifie chimiquement par photomarquage lors de l'etude des sites de liaison de la buche, - determine des sites specifiques d'hydrolyse de la gpv et de recepteurs couples aux proteines g (par 1, par 2).