Relations structure-fonction des domaines du facteur d'elongation tu, une gtpase cible d'antibiotiques. Un nouvel inhibiteur de la synthese proteique, l'enacyloxine iia

Structure function relationships of the domains of elongation factor tu, a gtpase target of antibiotics. Enacyloxin iia, a new inhibitor of protein syntesis

• Auteur / Autrice : RENGUL CETIN-ATALAY
• Direction : Andrea Parmeggiani
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Ef-tu, composant essentiel du cycle d'elongation de la synthese proteique chez e. Coli, est la proteine modele la mieux caracterisee parmi les protein liant les nucleotides guanyliques, son activite depend donc du type de nucleotide lie. Liee au gtp, la proteine ef-tu est dans l'etat actif, elle est susceptible d'interagir avec aa-arnt. Liee au gdp, elle se trouve dans l'etat inactif, la proteine presente une conformation qui ne permet pas l'interaction productive avec l'aa-arnt et le ribosome. Dans le cycle d'elongation, la fonction biologique d'ef-tu est d'orienter de facon correcte l'aa-arnt sur le site a du ribosome. L'un des objectifs principaux de ce travail a ete le mise en evidence du mode d'action d'un nouvel antibiotique : l'enacyloxine iia. Cet antibiotique affecte les activite intrinseques d'ef-tu de facon similaire a la kirromycine a l'exception de l'activite gtpasique qui n'est pas influence. Les resultats obtenus ont montre que l'enacyloxine iia inhibe l'incorporation de l'aa-arnt lie au site a du ribosome dans la chaine polypeptidique liee au site p. Lors da la liaison enzymatique de l'aa-arnt, l'enacyloxine iia interagit a la fois avec ef-tu et avec le ribosome. Les role fonctionnels des domaines non catalytique d'ef-tu ont ete etudies grace aux deux d'ef-tu mutees : ef-tu(m) delete des residus 205-294 et ef-tu(c) prive des residus 301-392. J'ai pu ainsi montrer que les domaines 2 et 3 ont des proprietes selective dans leur interaction avec ef-ts et avec les antibiotiques. La coordination des trois domaines d'ef-tu est importante pour une interaction productive avec ses ligands au cours du cycle d'elongation. Grace a la methode de mutagenese ciblee trois mutants resistants a la pulvomycine ont ete isoles : ef-tu(r230c), ef-tu(r233c), ef-tu(t334a). Les deux mutant les plus resistants, r230c et r233c, ont ete caracterise biochimiquement. J'ai aussi mise en evidence les modifications que la pulvomycine induit sur les activites intrinseques d'ef-tu et comparees a celles introduits par les autres antibiotiques.