Les supports réactifs en biochromatographie : échanges par réaction thiol-disulfure et par formation de complexes métalliques

Reactive supports in biochromatography : thiol-disulfide interchanges and reactions with metal chelates

• Auteur / Autrice : Marie-Claude Millot
• Direction : Bernard Sébille
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 12

Mots clés

Mots clés contrôlés

Polymères

Complexes métalliques

Thiols

Protéines

Chromatographie en phase liquide

Résumé

Des materiaux reactifs ont ete synthetisees et utilises comme phases stationnaires en chromatographie en phase liquide. Ils sont capables d'interagir avec les substances a analyser ou a purifier par l'intermediaire de liaisons covalentes. Deux types de reactions ont ete etudies: des reactions d'echange thiol-disulfure et des reactions de formation de complexes. Les materiaux portant des fonctions thiol ou disulfure ont ete obtenus par modification en deux etapes de gels de polyacrylamide reticule (biogelp) (0,2 mmole sh par g. ), par greffage sur de la silice de mercaptopropylsilane (0,35 mmole sh par g. ), et par modification de polymeres hydrophiles (pvi; pdma-ga) deposes sur de la silice (0,09 a 0,3 mmole sh par g. ). Les gels macromoleculaires et les silices recouvertes de polymeres ont ete utilises pour purifier par chromatographie de covalence des proteines contenant des fonctions thiol: la papaine et la bsa; apres purification, ces proteines ont une teneur en thiol voisine de la valeur theorique (1 sh/mole). La resistance mecanique des materiaux rigides est tres superieure a celle des biogels. De ce fait, seuls les supports a base de silice peuvent etre employes, apres activation par un disulfure chromophore, pour colorer des thiols issus d'une colonne hplc. Les conditions optimales de detection ont ete determinees; la limite de detection est alors egale a 0,02 nmoles. D'autre part des complexes metalliques immobilises ont ete obtenus par complexation du cu(ii) par du pvi depose sur de la silice (0,06 moles cu(ii). G##1 et analyses par rpe. Ceux-ci peuvent fixer des peptides et des proteines contenant des residus histidine ou tryptophane accessibles. Dans le cas des proteines, il a ete montre que les interactions de type donneur-accepteur etaient accompagnees d'autres effets de nature electrostatique et/ou hydrophobe