Etude structurale et fonctionnelle du domaine catalytique de la poly(adp-ribose) polymerase humaine

Structural and functional study of the catalytic domain of human poly(adp-ribose) polymerase

• Auteur / Autrice : FREDERIC SIMONIN
• Direction : Gilbert de Murcia
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

La poly(adp-ribose) polymerase est une enzyme nucleaire associee a la chromatine. En presence de nad comme substrat elle catalyse la polymerisation de residus adp-ribose en un homopolymere branche (le poly(adp-ribose)) et l'attachement de ce polymere a des proteines nucleaires acceptrices ainsi qu'a elle-meme. Son activite est dependante de la presence de coupures simple et double brin dans l'adn. Dans un premier temps, nous avons mis au point un systeme permettant de visualiser sur nitrocellulose l'activite de l'enzyme ainsi que celle des peptides conservant le site actif. L'analyse par cette technique de proteines tronquees realisees a partir du cdna et produites dans e. Coli nous a permis de trouver un fragment minimal de la poly(adp-ribose) polymerase conservant une activite catalytique. Par la suite nous avons initie une etude de ce domaine par mutagenese dirigee. Parallelement nous avons purifie en grande quantite le domaine catalytique produit dans e. Coli ainsi que l'enzyme entiere produite dans des cellules d'insectes en vue d'une etude cristallographique