Implications des proteines de la famille ras et de la kinase eg2 dans le mecanisme d'action de la progesterone dans l'ovocyte de xenope

• Auteur / Autrice : NABILA TALBI
• Direction : Catherine Jessus
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Nos recherches portent sur les mecanismes de regulation de la reprise de la meiose de l'ovocyte de xenope. L'ovocyte de xenope est naturellement arrete en prophase de premiere division meiotique. Il reprend la meiose en reponse a une hormone steroide, la progesterone. Quelques heures apres la mise en contact avec l'hormone, l'activation du facteur mpf (maturation ou m-phase promoting factor) entraine la rupture de l'enveloppe nucleaire (gvbd) et l'entree en premiere division de meiose. L'ovocyte est bloque ensuite en metaphase ii, stade auquel il devient fecondable. Nos connaissances du mecanisme par lequel la progesterone induit la maturation de l'ovocyte de xenope sont fragmentaires. Ce mecanisme d'action est original dans la mesure ou le recepteur a la progesterone de l'ovocyte a une localisation membranaire, et ou l'action de l'hormone est post-transcriptionnelle. La progesterone conduit a l'activation du mpf via une baisse d'activite de la kinase dependant de l'ampc, pka, et la neosynthese de proteines. Nous nous somme interesses a l'etude des etapes initiales de l'action de la progesterone. Nous avons etudie le role des petites proteines g de la famille de ras au cours de la reprise de la meiose de l'ovocyte. Pour cela, nous avons adopte une strategie basee sur l'inhibition de la proteine ras endogene par la toxine letale, lt, une toxine de clostridium sordellii, qui inactive par glucosylation les petites g de la famille ras. La microinjection de la lt dans l'ovocyte induit la maturation avec des caracteristiques analogues a celle induite par la progesterone : dependance vis-a-vis de la neosynthese de proteines et d'une baisse de l'activite pka. Nos resultats suggerent qu'une proteine de la famille ras serait regulee negativement par la progesterone, participerait a la chute d'activite de l'adenylate cyclase necessaire a l'activation du mpf et contribuerait ainsi au maintien physiologique de l'ovocyte en prophase i. Tres recemment, il a ete rapporte que la proteine kinase eg2 etait une cible precoce de l'action de la progesterone dans l'ovocyte de xenope. La possibilite que cette kinase soit un effecteur d'une proteine ras endogene nous a conduit a etudier son activite au cours de la maturation. Nous avons montre que la proteine eg2 s'accumule en reponse a la progesterone au moment de gvbd et reste stable jusqu'en metaphase ii. Cette accumulation est dependante de la chute d'activite de pka et de la concentration en ampc, mais est independante de l'activation du mpf. La polyadenylation et la methylation du ribose en 5 de son arnm ne sont pas necessaires pour son accumulation. L'activite de la kinase eg2 apparait a gvbd et continue a augmenter jusqu'en metaphase ii. L'activation de la kinase eg2 est cette fois dependante de l'activation du mpf. Nos resultats montrent que la proteine eg2 est regulee par la progesterone a 2 niveaux : l'accumulation de la proteine est regulee en amont du mpf, alors que son activite l'est en aval. Ceci suggere qu'eg2 joue un role dans l'organisation du fuseau de division, un role particulierement conserve au sein de la famille ipl1/aurora dont eg2 fait partie, et non dans les etapes precoces initiees par la progesterone.