La microscopie confocale multimodale. Analyse moleculaire en histopathologie

Bimodal confocal microscopy. Molecular analysis in pathology

• Auteur / Autrice : LUIS-GUSTAVO LINARES-CRUZ
• Direction : Fabien Calvo
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Nous avons developpe une approche methodologique nouvelle pour la detection des sequences nucleotidiques specifiques sur cellules et sur tissus. Nous avons combine l'analyse par microscopie confocale en fluorescence et en reflectance. Les apports principaux de cette methodologie sont sa haute sensibilite, sa precision extreme et sa resolution spatiale. Nous demontrons que l'utilisation combinee de la microscopie confocale en mode fluorescent et de la microscopie confocale en reflection permet la detection simultanee de sequences nucleotidiques specifiques (en reflectance) et de marqueurs de structure et de proliferation (en fluorescence). Un des apports majeures de notre travail a porte sur le developpement de la technique de reflectance appliquee a la detection de signaux d'hybridation arn rish, ce qui permet l'utilisation de deux systemes marqueurs en his combinee a l'analyse de parametres de texture nucleaire et la localisation de proteines. Nous avons analyse par multimarquage enmicroscopie confocale la distribution de sequences nucleotidiques (arnm) des genes rhob et rhoc et de proteines nucleaires (rho a, b ; pml) ou du golgi (bcma) dans des modeles experimentaux cellulaires in vitro et dans des tissus humain normaux et pathologiques (sein, peau, colon). La visualisation simultanee des structures subcellulaires et des signaux specifiques de ces biomolecules, nous a permis d'etudier leur distribution fine dans les differents compartiments intracellulaires. L'etude de la dynamique de proliferation in situ (fraction proliferante et cellules en mort cellulaire programme) a ete combinee a l'hybridohistochimie et a permis d'analyser l'expression de ces genes au cours de la proliferation et de l'apoptose