Analyse du métabolisme cellulaire et de sa régulation par spectroscopie de RMN de cellules gliales : astrocytes et gliomes C6

Analysis of cell metabolism and its regulation by nuclear magnetic resonance of glial cells : astrocytes and c6 glioma

• Auteur / Autrice : Isabelle Pianet
• Direction : Paul Canioni
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Bordeaux 2

Mots clés

Mots clés contrôlés

Récepteurs bêta-adrénergiques

Résumé

Dans la perspective d'etudier les interactions entre neurones et cellules gliales par spectroscopie de resonance magnetique nucleaire, nous avons dans un premier temps, caracterise les fonctions typiquement gliales, soit en utilisant comme modele une lignee cellulaire, soit en travaillant sur des cellules gliales isolees du systeme nerveux central. La premiere partie de ce memoire presente la mise au point d'une methode permettant l'etude des phosphorylations precoces de proteines in situ induites par la stimulation de recepteurs beta-adrenergiques par electropermeabilisation. D'une part, la synthese d'ampc est affectee par l'application d'un champ electrique. Cette inhibition provient de la fuite de gtp. D'autre part, la synthese d'ampc est aussi inhibee par l'addition d'atp au milieu exterieur. Cette inhibition se fait par l'intermediaire d'un recepteur purique couple negativement a l'adenylyl cyclase et sensible a l'adp, produit d'hydrolyse de l'atp. La caracterisation des deux inhibitions nous a permis de trouver un moyen de les reduire de facon a pouvoir utiliser cette technique pour l'etude des phosphorylations de proteines. La deuxieme partie presente la comparaison du metabolisme energetique, par rmn du phosphore 31 et du metabolisme intermediaire par rmn du carbone 13, de gliomes c#6 et d'astrocytes. Une mise au point methodologique a permis d'aborder cette etude quantitativement a partir de spectres de cellules vivantes et d'extraits. La comparaison du metabolisme cellulaire montre que les deux types de cellules presentent leur contenu en metabolites energetiques lors d'une anoxie ou d'une carence en glucose. Par contre, a partir de glucose enrichi, les astrocytes synthetisent du glutamate puis de la glutamine aux depens de la synthese d'autres acides amines alors que les cellules c6 synthetisent indifferemment de l'aspartate, de l'alanine et de la serine. Enfin, le contenu en metabolites energetiques a ete suivi au cours de la stimulation des recepteurs beta-adrenergiques sur les cellules c6 vivantes et sur leurs extraits en utilisant la rmn du phosphore 31. Si une synthese maximale d'ampc n'affecte pas le contenu en atp des cellules, la concentration en phosphocreatine chute au cours de la stimulation, suggerant que ce metabolite est utilise pour regenerer l'atp consomme lors de la synthese d'ampc. De plus, l'etude par rmn du carbone 13, des modifications du metabolisme intermediaire induites par la stimulation des recepteurs beta-adrenergiques a permis de montrer une regulation au niveau de la voie de synthese des pentoses phosphates et de la glycolyse