Identification des nouvelles phospholipases A microbiennes : purification et caractérisation biochimique d’une phospholipase A2 fongique secrétée

Identification of novel microbial phospholipases A and the purification and biochemical characterization of a secreted fungal phospholipase A2

• Auteur / Autrice : Priscila Sutto Ortiz
• Direction : Abdelkarim Abousalham, Alexandre Noiriel, Jorge Alberto Rodriguez Gonzalez
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie. Microbiologie. Enzymologie
• Date : Soutenance le 05/10/2017
• Etablissement(s) : Lyon en cotutelle avec Centro de investigación y asistencia en tecnología y diseño (Estado de Jalisco, Mexico)
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Interdisciplinaire Sciences-Santé (Villeurbanne ; 1995-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : ICBMS - Institut de Chimie et Biochimie Moléculaires et Supramoléculaires - UMR 5246 (Villeurbanne, Rhône)
• Partenaire(s) de recherche : établissement opérateur d'inscription : Université Claude Bernard (Lyon ; 1971-....)
• Jury : Président / Présidente : Agnès Girard-Egrot
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Frédéric Carrière, Juan Carlos Mateos Diaz
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Ewa Rogalska, Françoise Ergan

Mots clés

Mots clés contrôlés

Criblage pharmacologique

Champignons

Actinomycètes

Phospholipase A2

Mots clés libres

Phospholipase A

Actinomycètes

Champignons

Isoformes

Criblage à haut débit

Fermentation en milieu solide

Groupe XIV sPLA2

Phospholipase A

Actinomycetes

Fungi

Isoforms

High-throughput screening

Solid-state fermentation

Group XIV sPLA2

Résumé

Les phospholipases A catalysent sélectivement l'hydrolyse de la liaison ester des glycérophospholipides dans la position sn-1 (PLA1) et sn-2 (PLA2), libérant des acides gras et des lysophospholipides. Nous avons identifié des PLAs à partir des champignons/actinomycètes isolés des environnements du Mexique. Dans la 1ère partie, une méthode colorimétrique à haut débit pour la détection générale de l'activité PLA (cHTS-PLA) avec la PC comme substrat et le rouge crésol a été développée. L'analyse rRNA 16S des souches productrices des PLAs a démontrant qu'elles appartiennent aux genres Streptomyces et Aureobasidium. La production des PLAs a été mise en œuvre utilisant la fermentation en milieu solide avec la PC comme inducteur et la bagasse de canne à sucre comme support. Globalement, cette étude a contribué à la découverte des nouvelles PLA et au criblage des PLAs à haut débit dans les extraits microbiens

Phospholipase A are lipolytic enzymes that hydrolyze selectively the ester bond of glycerophospholipid substrates at the sn-1 (PLA1) and sn-2 (PLA2) position, respectively, releasing free fatty acids and lysophospholipids. We identified new PLAs from fungi and actinomycetes isolated from Mexican environments. Firstly, we implemented an agar-plate method containing rhodamine 6G and phosphatidylcholine (PC) for the primary screening. Then, a colorimetric high-throughput screening assay for general PLA activity detection (cHTS-PLA) using PC substrate and cresol red was developed. According to 16S rRNA analysis, PLA producing strains were mostly belonging to Streptomyces and Aureobasidium genus. Production of PLAs was implemented by solid-state fermentation with PC as inductor and sugar-cane bagasse as support. Overall, this study has contributed to the discovery of new microbial PLAs and to pave the way toward the HTS of PLA activity in microbial extracts