Transport du pyruvate et régulations du métabolisme central par le malate chez Bacillus subtilis
Auteur / Autrice : | Teddy Charbonnier |
Direction : | Stéphane Aymerich |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences de la vie et de la santé |
Date : | Soutenance le 22/03/2016 |
Etablissement(s) : | Université Paris-Saclay (ComUE) |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Structure et dynamique des systèmes vivants (Gif-sur-Yvette, Essonne ; 2015-....) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Microbiologie de l'Alimentation au Service de la Santé humaine (Jouy-en-Josas) |
établissement opérateur d'inscription : Université Paris-Sud (1970-2019) | |
Jury : | Président / Présidente : Isabelle Martin-Verstraete |
Examinateurs / Examinatrices : Stéphane Aymerich, Isabelle Martin-Verstraete, Ciarán Condon, Fabien Letisse, Thierry Doan, Matthieu Jules, Philippe Bouloc | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Ciarán Condon, Fabien Letisse |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Mots clés libres
Résumé
Chez Bacillus subtilis comme pour toutes les bactéries, le métabolisme central du carbone est essentiel pour la croissance de la cellule. Elle utilise le glucose (source de carbone glycolytique) et le malate (source de carbone gluconéogenique) comme sources de carbone préférentielles. Ces deux sources de carbone sont capables d'induire la répression catabolique au travers de la protéine régulatrice CcpA et ainsi d'établir une hiérarchie dans l'utilisation des sources alternatives de carbone. Au centre du métabolisme du carbone se trouve le pyruvate que B. subtilis est capable d'utiliser comme seule source de carbone, mais son transporteur reste inconnu.Des analyses transcriptomiques ont montré que seul l'opéron ysbAB était spécifiquement induit en présence de pyruvate, et nous avons montré que sa délétion entraînait une perte de croissance presque totale sur pyruvate. En utilisant des protéines étiquetées, nous avons mis en évidence qu'YsbA et YsbB formaient un complexe se localisant à la membrane. Nous avons ensuite montré que ce complexe est le transporteur principal du pyruvate et fonctionne comme un transporteur par diffusion facilitée. A l'aide d'une fusion rapportrice, nous avons démontré que l'opéron lytST situé en amont d'ysbAB, et codant pour un système à deux composants, était responsable de l'induction d'ysbAB. Nous avons également montré qu'en plus d'une répression par CcpA en présence de glucose ou de malate, une régulation dépendante de l'activité enzyme malique de MaeA s'exerce sur ysbAB. Cette régulation est due à l'accumulation de pyruvate dans la cellule qui perturbe l'activation d'ysbAB par LytST.Nous avons aussi montré qu'une régulation indépendante de CcpA s'exerce sur dctP, le gène codant pour le transporteur du succinate et du fumarate en présence de malate, suggérant un mécanisme similaire à celui observé pour ysbAB. Enfin, nous avons montré que le flux métabolique traversant MaeA était également impliqué dans la régulation par CcpA de l'entrée des sources glycolytique par le malate.