Caractérisation morphologique et moléculaire du néphroblastome, du blastème et de la région chromosomique 11p15 en particulier

Morphologic and molecular carachterisation of Wilms tumor focusing on blastema and 11p15 region

• Auteur / Autrice : Linda Dainese
• Direction : Yves Le Bouc, Aurore Coulomb L'Hermine
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génétique, pathologie, oncologie
• Date : Soutenance le 19/09/2016
• Etablissement(s) : Paris 6
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale physiologie, physiopathologie et thérapeutique
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de recherche Saint-Antoine (Paris ; 2009-....)
• Jury : Président / Présidente : Georges Audry
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Eva Compérat, Laurence Brugieres, Gabriel Malouf
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Yves Allory, Alain Doucet

Mots clés

Mots clés contrôlés

Maladies rénales

Cancer

Méthylation

Néphroblastome

Mots clés libres

Néphroblastome

SIOP-2001

Blastéme

11p15

IGF2

Méthylation

Wilms

SIOP-2001

Blastema

Résumé

La tumeur de Wilms (WT) est la tumeur du rein la plus fréquente chez l'enfant âgé de moins de 5 ans. Bien que la majorité des enfants avec WT soit aujourd'hui soignée, 10 à 15% rechutent. L'identification de nouveaux marqueurs pronostic au diagnostic est donc nécessaire. Nous avons centralisé le matériel biologique de toutes les WTs françaises inclus dans le protocole SIOP-2001. Le blastème, la composante histologique la plus agressive de ces tumeurs, a été caractérisé par une analyse qualitative (architecture et aspect cytologique, index mitotique et prolifératif) et quantitative (volume et pourcentage). En collaboration avec les équipes européennes du Renal Tumor Study Group nous avons caractérisé les anomalies structurales de la WT par Multiple Ligation Probe Amplification (MLPA). De plus, nous nous sommes focalisés sur la région 11p15, où le gène IGF2 est localisé, en analysant les anomalies structurales et de méthylation au niveau de différents loci (IGF2-DMR0, ICR1, ICR2, H19), par MLPA et par ASMM RTQ- PCR (TaqMan allele-specific methylated multiplex real-time quantitative PCR). Nous avons de plus étudié l'expression d'IGF2 par RT-QPCR. Une dernière partie de notre étude a porté sur la caractérisation de la réponse immune intratumorale par immunohistochimie (CD3, CD4, CD8, PD1, PDL1). En conclusion, nous avons identifié des potentiels marqueurs pronostiques concernant la prise en charge des WTs: volume et pourcentage de blastème, index mitotique et de prolifération, perte de méthylation d'IGF2-DMR0 et rapport CD4/CD8. Ce travail pourrait contribuer à la détermination d'une nouvelle classification bio-pathologique de la WT.

Wilms tumor (WT) is the most common tumor of the kidney in children aged under 5 years. Although the majority of children with WT survives, 10-15% relapse. The identification of new prognosis markers at diagnosis is necessary. We centralized the biological material of all French WTs included in the SIOP-2001 protocol. The blastema, the most aggressive histological component of these tumors, was characterized by qualitative (architectural and cytological aspect, proliferative and mitotic index) and quantitative analysis (amount and percentage). In collaboration with European teams Renal Tumor Study Group we characterized the structural abnormalities of the WT by Multiple Ligation Probe Amplification (MLPA). In addition, we focused on the 11p15 region, where the IGF2 gene is located, analyzing the structural abnormalities and methylation at different loci (IGF2-DMR0, ICR1, ICR2, H19) by MLPA and ASMM RTQ - PCR (TaqMan allele-specific methylated multiplex quantitative real-time PCR). We also studied the expression of IGF2 by RT-QPCR. A final part of our study focused on the characterization of intratumoral immune response by immunohistochemistry (CD3, CD4, CD8, PD1, PDL1). In conclusion, we identified potential prognostic markers for the management of WTs: volume and percentage of blastema, mitotic and proliferation index, loss of IGF2 methylation-DMR0 and CD4 / CD8 ratio. This could contribute to the determination of a new bio-pathological classification of WT.