Etude du régulateur transcriptionnel SigmaD chez Clostridium difficile

par Imane El Meouche

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Martine Pestel-Caron.


  • Résumé

    La principale partie de ce travail porte sur l'étude du facteur SigD de C. Difficile et de son implication dans la régulation de l'autolyse, de la mobilité et de la production de ses deux facteurs majeurs de virulence, les toxines A et B. Nous avons pu montrer, par inactivation du gène sigD, que SigD régule positivement la mobilité de C. Difficile mais n'affecte pas, ou peu son autolyse. Le régulon global de SigD a été ensuite déterminé par une analyse transcriptonique en microarrays. Parmi les gènes sous-exprimés chez le mutant du gène sigD, nous retrouvons les gènes flagellaires tardifs, les gènes des toxines A et B et le gène de leur régulateur TcdR. Nous avons pu identifier des promoteurs SigD-dépendants notamment en amont des gènes de la flagelline FliC, de l'anti-SigD FlgM et deTcdR. De plus, nous avons prouvé que SigD se lie avec l'ARN polymérase pour démarrer la transcription de tcdR, dont il est un régulateur direct. Par ailleurs, nous avons identifié une séquence consensus propre au régulateur SigD chez C. Difficile. Enfin, nous avons déterminé le rôle antagoniste de FlgM, l'anti-SigD, dans la répression des gènes SigD dépendants. SigD s'avère être un régulateur positif et direct de la mobilité et de la synthèse des toxines chez C. Difficile. Une partie complémentaire du travail s'intéresse aux autolysines Acd et Cwp19 de C. Difficile. Des mutants simples des gènes acd et cwp19 ont permis de montrer que seule Cwp19 intervient dans l'autolyse de C. Difficile en présence du TritonX-100. Cette autolysine est impliquée dans la lyse à long terme chez C. Difficile. Un double mutant acd-cwp19 semble avoir le même profil autolytique que le simple mutant cwp19. La glucosaminidase Acd ne semble donc pas avoir une implication majeure dans l'autolyse de C. Difficile. Des analyses complémentaires en cours de réalisation permettront de déterminer l'activité enzymatique de l'autolysine Cwp19

  • Titre traduit

    Study of the transcriptional regulator Sigma D in Clostridium difficile


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    The main part of this work focuses on the characterization of the C. Difficile SigD factor and its role in the regulation of autolysis, motility and production of the two major virulence factors, toxins A and B. After the inactivation of sigD, we show that SigD factor positively controls C. Difficile motility whereas its contribution to the autolysis, if any, is modest. The global regulon of SigD was then determined by transcriptonic analysis using microarrays. Among the down-regulated genes in the sigD mutant strain, we find the late flagellar genes, the genes encoding toxins A and B and the gene encoding their regulator TcdR. We could identify SigD-dependent promoters upstream many genes including those encoding the flagellin FliC, the anti-SigD FlgM, and TcdR. In addition, we proved that SigD binds with RNA polymerase to initiate the transcription of tcdR. Furthermore, we identified a specific SigD-dependent consensus sequence in C. Difficile. Finally, we determined the antagonistic role of FlgM, the anti-SigD, in the repression of SigD-dependent genes. We prove that SigD is a positive and direct regulator of motility and toxin synthesis in C. Difficile. Another part of the work focuses on the autolysins Cwp19 and Acd of C. Difficile. Single mutants for acd and cwp19 genes showed that only Cwp-19 is involved in the long-term lysis of C. Difficile. A double-mutant acd-cwp19 seems to have the same autolytic profile as cwp19 single mutant. The glucosaminidase Acd does not seem to have a major involvement in autolysis of C. Difficile. Additional analyzes are in progress to determine the enzymatic activity of the Cwp19 autolysin.

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  • Détails : 1 vol. (189 p.)
  • Annexes : Bibliogr. 417 références

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  • Bibliothèque : Université de Rouen. Service commun de la documentation. Section Lettres-Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 14/ROUE/S008
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