SNARE et trafic membranaire intracellulaire : rôle de SNAP-47 nouveau partenaire des SNARE vésiculaires

SNARE and intracellular membrane traffic : role of SNAP-47, new partner of vesicular SNAREs

• Auteur / Autrice : Aurélia Kuster
• Direction : Thierry Galli
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie Cellulaire
• Date : Soutenance en 2013
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Protéomique

Phosphorylation

Protéines R-SNARE

Protéines SNARE

Résumé

Le trafic vésiculaire permet le transport des protéines et des lipides entre les compartiments intracellulaires. Les v-SNARE, à la membrane des vésicules et les t-SNARE, à la membrane des compartiments cibles, interagissent via leurs domaines SNARE, et forment un complexe permettant la fusion membranaire. TI-VAMPNAMP7 est un v-SNARE présent au niveau de l'appareil de Golgi, des endosomes tardifs et des lysosomes, qui intervient dans le transport apical, la croissance neuritique et la migration cellulaire. Nous avons montré d'une part que TI-VAMP est phosphorylée par c¬Src et qu'un mutant phospho-mimétique active son exocytose. D'autre part, par une approche protéomique, nous avons mis en évidence une interaction entre TI-VAMP et le t-SNARE SNAP-47. Nous avons montré que SNAP-47 interagit aussi avec VAMP4 et VAMP8, et présente une localisation périnucléaire, proche du réticulum endoplasmique et de l'ERGIC. Un mutant délété de son domaine carboxy-terminal, que nous avons généré, interagit toujours avec les v¬SNARE VAMP4,7, et 8 et affecte la distribution des VAMP4 et 7, suggérant un rôle de SNAP-47 dans leur localisation subcellulaire. Par ailleurs, ce mutant est partiellement délocalisé au noyau. SNAP-47 possède des signaux de localisation et d'export nucléaire et un traitement des cellules à la leptomycine B induit la relocalisation de la protéine sauvage au noyau, suggérant un transit entre noyau et cytoplasme. SNAP-47 apparaît donc différente des t-SNARE classiques et pourrait intervenir dans d'autres mécanismes, que la fusion membranaire. Nous suggérons que SNAP-47 pourrait notamment jouer un rôle de chaperonne en régulant la localisation des v-SNARE partenaires.

Vesicular trafficking allows for protein and lipid transport between intracellular compartments. V-SNAREs, present at the vesicular membrane, and t-SNAREs, present at the target membrane, interact via their SNARE domains, and form a complex that allows membrane fusion. TI-VAMPNAMP7 is a v-SNARE localized in the Golgi apparatus, late endosomes and lysosomes, which plays a role in apical transport, neurite growth and cell migration. First, we showed that TI-VAMP is phosphorylated by c-src and that a phosphomimetic mutant activates its exocytosis. Secondly, by a proteomics approach, we found that TI-VAMP interacts with the t-SNARE SNAP-47. We highlighted that SNAP-47 interacts also with VAMP4 and VAMP8, and has a perinuclear localization, closed to the endoplasmic reticulum and the ERGIC. A carboxy-terminal domain deleted mutant still interacts with VAMPs 4, 7 and 8 and affects VAMPs 4 and 7 distribution, suggesting a role of SNAP-47 in the v-SNAREs' subcellular localization. Moreover, SNAP-47 mutant is partially delocalized to the nucleus. SNAP-47 possesses nuclear localization and export signais, and cell treatment with leptomycine B induces relocalization of the WT protein in the nucleus, suggesting a transit between nucleus and cytoplasm. Thus, SNAP-47 appears different from classical t-SNAREs and could potentially have a fonction in other mechanisms than membrane fusion. We suggest that SNAP-47 could play a role of chaperone by regulating its v-SNARE partners'localization.