Identification des gènes controllant le syndrome lymphoproliferatif se developpant dans des souris depourvues de l'adaptateur lat

Identifying genes modulating lymphoproliferative disorder originating from lat deficiency in T cells

• Auteur / Autrice : Yinming Liang
• Direction : Marie Malissen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance le 19/09/2013
• Etablissement(s) : Aix-Marseille
• Ecole(s) doctorale(s) : École Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille)
• Jury : Président / Présidente : Philippe Naquet
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Immo Prinz, Jean louis Guenet

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lymphocytes T

Génomique

Syndromes lymphoprolifératifs

Mots clés libres

Lat adaptateur

Syndrome lymphoproliferatif

Genomique fonctionelle

Rltp

Lat adapt

Lymphoproliferative disorder

Forward genetics

Rltp

Résumé

Lat est clé dans le développement des cellules T. En l'absence de Lat, le développement des cellules T au niveau du thymus est complètement bloqué au stade DN3. Le développement des lymphocytes T est très diminué dans des souris knockin LatY136F dans lesquelles la tyrosine présente en position 136 de la protéine Lat est remplacée par une phénylalanine. De manière paradoxale, le petit nombre de cellules T qui émergent dans la périphérie des souris LatY136F donnent naissance à un syndrome lymphoprolifératif Th2 sévère. Ce projet vise à identifier les facteurs génétiques qui contribuent au développement d'un tel syndrome lymphoprolifératif. A la suite d'un crible génétique basée sur une mutagenèse à l'ENU (N-éthyl-N-nitrosurea), des lignées de souris mutantes LatY136F présentant une pathologie atténuée ou exacerbée ont été fixées et les mutations induites chimiquement ont été cartographiées et identifiées. En particulier, nous avons obtenu une lignée mutante appelée Basilic dépourvue du syndrome lymphoprolifératif. Le clonage positionnel assisté par les techniques de séquençage à haut-débit de l'ADN ont permis l'identification d'un gène appelé, Rltpr ou Lrrc16c, et ne possédant aucune fonction immunologique connue. Nous avons montré que Rltpr constitue un élément clé de la voie de signalisation opérée par la molécule de costimulation CD28. Les résultats principaux obtenus au cours de la thèse sont présentés sous forme d'un article publié. Un chapitre de perspective est consacré ensuite aux améliorations que nous pourrions apporter au type d'approche que nous avons réalisé. Enfin une dernière rubrique traite des outils permettant la manipulation du génome de la souris.

Lat is essential for proper T cell development. In the absence of Lat, intra thymic T cell development is completely blocked at an early stage known as the DN3 stage. LatY136F mice in which the tyrosine found at position 136 of Lat was replaced by a phenylalanine, also showed an impaired sequence of intrathymic T cell development. Paradoxically, the small number of improperly selected T cells that reach the periphery of LatY136F mice expand in an uncontrolled manner and trigger a severe Th2 lymphoproliferative disorder. The present thesis project aimed at identifying genetic factors contributing to the development of such a lymphoproliferative disorder. Using a sensitized ENU mutagenesis screen, we identified and characterized mutations that dampened or exacerbated the LatY136F pathology. A mutation that is called Basilic and that acts in a T cell intrinsic manner and completely prevented the LatY136F lymphoproliferative disorder was characterized in a comprehensive manner. Positional cloning assisted by next generation DNA sequencing demonstrated that Basilic corresponds to a mutation in a gene called Rltpr or Lrrc16c, the function of which was previously completely unknown in the frame of the immune system. Further functional studies performed during this project showed that Rltpr corresponded to a “missing link” involved in the signaling cascade that mediates the function of the co-stimulatory molecule CD28. Consistent with that view, nullozygous Cd28 mutant mice were found to be a phenocopy of the Basilic mice and as such prevented lymphoproliferative disorder in LatY136F mice. The Basilic mutation also resulted in a defect in regulatory T cell development.