Détection et évaluation "in chimico" des allergènes de contact : intérêt des microémulsions pour la mesure de la réactivité peptidique et l'activation enzymatique des pro-haptènes
Auteur / Autrice : | Fabien Merckel |
Direction : | Jean-Pierre Lepoittevin, Elena Gimenez-Arnau |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Chimie organique |
Date : | Soutenance en 2011 |
Etablissement(s) : | Strasbourg |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Mots clés libres
Résumé
Actuellement, la détection des sensibilisants cutanés est basée sur l’utilisation d’animaux. Cependant, la pression sociale pour l’abandon des tests « in vivo » est de plus en plus forte. Partant du postulat que le potentiel de sensibilisation d’une molécule peut être corrélé à sa réactivité chimique envers les protéines, le Direct Peptide Reactivity Assay (DPRA), un test « in chemico » basé sur la réactivité peptidique, a été développé. Néanmoins, à l’heure actuelle, le DPRA présente plusieurs limitations. Il est peu compatible avec des molécules très lipophiles à cause de problèmes de solubilité et ne permet pas non plus d’évaluer les pro- et pré-haptènes nécessitant, au préalable, une étape d’activation pour devenir sensibilisants. Afin de surmonter ces difficultés, de nouvelles approches ont été explorées, en particulier l’utilisation de microémulsions comme solvant. Les réactions d’haptènes connus vis-à-vis de trois peptides (les deux peptides du DPRA et le glutathion) ont ainsi été conduites dans une microémulsion et comparées à celles effectuées dans le milieu semi-organique classique. Des études de RMN réalisées avec des haptènes marqués au carbone 13 ont permis de mettre en évidence que la microémulsion était compatible avec un test de réactivité peptidique. De plus il a été montré que la microémulsion permettait d’accroître la solubilité de composés lipophiles et de moduler la vitesse de certaines réactions. D’autre part, l’intégration d’une étape d’oxydation enzymatique par une peroxydase a permis, au travers d’expériences de RMN et de CL/SM, d’identifier des métabolites potentiellement impliqués dans des phénomènes de sensibilisations à des pro-haptènes.