Interaction entre les lamines de type A sauvages ou mutées et le facteur de transcription SREBP1 : caractérisation et impact sur la liaison de SREBP1 à l'ADN

par Stéphanie Woerner

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire

Sous la direction de Brigitte Buendia.

Soutenue en 2011

à Paris 7 .


  • Résumé

    Les lamines de type A (prélamine A, lamines A et C) sont des protéines nucléaires codées par le gène LMNA. Elles jouent un rôle dans la structure du noyau et dans la régulation de l'expression de gènes grâce à leur capacité à interagir avec divers partenaires. Nous avons caractérisé l'interaction des lamines A/C avec le facteur de transcription SREBP1 (Sterol Regulatory Elément Binding Protein 1) impliqué dans la différenciation adipocytaire, afin d'élucider le mécanisme par lequel SREBP1 serait inactivé dans les lipodystrophies causées par des mutations du gène LMNA. Les tests de pull-down réalisés avec des domaines protéiques purifiés ont montré qu'/w vitro i) le domaine 227-487 de SREBP1, qui inclut les régions de liaison à l'ADN et de dimérisation (bHLH-zip), interagit avec un domaine de la région carboxyl-terminale des lamines qui est commun à la prélamine A et aux lamines A/C; et ii) les lamines mutées R482W et R453 W, responsables de lipodystrophie (FPLD) et de dystrophie musculaire (AD-EDMD), présentent un gain d'interaction pour SREBP1. De plus, les tests de retard sur gel et de pull-down réalisés en présence d'ADN SRE (Sterol Response Elément) suggèrent i) un chevauchement des sites d'interaction pour les lamines et l'ADN au sein du domaine 227-487 de SREBP1, et ii) une interaction préférentielle de SREBP1 avec l'ADN plutôt qu'avec les lamines, en raison de constantes d'affinités différentes. Nos résultats suggèrent que dans les cellules de tissu adipeux dystrophique, SREBP1 serait séquestré par les lamines de type A avant d'avoir lié ses séquences d'ADN cibles, inhibant ainsi sa fonction de facteur de transcription.

  • Titre traduit

    Interaction between wild-type or mutated A-type lamins and the transcription factor SREBP1 : characterization and impact on SREBP1 binding to DNA


  • Résumé

    A-type lamins (prelamin A, lamins A and C) are nuclear proteins encoded by the LMNA gene. They play a role in the nuclear structure and in the regulation of gene expression due to their capacity to interact with many partners. We have characterized the interaction of A-type lamins with the transcription factor SREBP1 (Sterol Regulatory Element Binding Protein 1) involved in adipocyte differentiation, in order to elucidate the mechanisms by which SREBP1 would be inactivated in lipodystrophies caused by LMNA gene mutations. Pull-down assays performed with purified protein domains have shown that in vitro i) the domain 227-487 of SREBP1 that includes the DNA binding and the dimerization regions (bHLH-zip), interacts with a domain of the carboxyl-terminal region of lamins that is commun to prelamin A and lamins A/C; and ii) the R482W and R453W variants of lamins identified in lipodystrophy (FPLD) and muscular dystrophy (AD-EDMD) bound to SREBP1 227-487 with increased avidity. In addition, electrophoretic mobility shift assays and pull- down assays performed in the presence of SRE DNA(Sterol Response Element DNA) suggest i) an overlap of the interaction sites for lamins and DNA within the domain 227-487 of SREBP1 and ii) a preferential interaction of SREBP1 with DNA than with lamins, due to different affinity constants. Our results suggest that in cells of dystrophic adipose tissue, SREBP1 would be inactivated due to its sequestration by A-type lamins before reaching its target DNA sequences.

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Informations

  • Détails : 1 vol. ([120] f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 125 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2011) 016
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 9311
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