Identification of beta amyloid partners by mass spectrometry

Recherche des partenaires de l'amyloïde-bêta 1-42 par spectrométrie de masse

• Auteur / Autrice : Séga Ndiaye
• Direction : Joëlle Vinh
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences du vivant
• Date : Soutenance en 2011
• Etablissement(s) : Paris 6

Mots clés

Mots clés contrôlés

Spectrométrie de masse

Vésicules synaptiques

Alzheimer, Maladie d'

Protéine amyloïde bêta

Résumé

L’utilisation de la protéomique et de la spectrométrie de masse est devenue indispensable pour la compréhension au niveau moléculaire de nombreuses pathologies. Le peptide amyloïde bêta (Aβ) 1-42 tient un rôle central dans le développement de la maladie d’Alzheimer (MA). Cependant, les mécanismes de la toxicité induite par ce peptide sont toujours mal connus. Ce travail vise à identifier les partenaires protéiques de la forme fibrillaire du peptide Aβ, afin d'avoir une meilleure comprehénsion des mécanismes moléculaires induits par ce peptide et d'identifier d'éventuels candidats comme cibles thérapeutiques de traitement contre la MA. Pour cela, nous avons mis en place une stratégie de co-précipitation des protéines en interaction avec le peptide Aβ 1-42 sous forme fibrillaire, en utilisant des protéines extraites de synaptosomes de rat. L’identification des protéines co-précipitées avec les fibrilles est réalisée en LC-MS/MS (Hesse et al. 2011) (ESI-LIT-FTICR). Les résultats obtenus sur six expériences indépendantes nous ont permis d’identifier 172 protéines spécifiquement co-précipitées à l’Aβ. Parmi ces protéines, 11 sont identifiées dans l’ensemble des réplicats biologiques Ras-related protein Ral-A, Cytochrome b-c1, amine oxidase B, 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type 2, mitochondrial import TOM70, Dynamin-like 120 kDA protein, Succinate dehydrogenase, LETM1, EF-hand domain containing protein, Up-regulated during skeletal muscle growth protein et Dihydrolipoyllysine-residue succinyltransferase component of 2-oxoglutarate dehydrogenase complex. . Certaines de ces protéines sont associées dans la littérature au contrôle de l’homéostasie du calcium, ou l’organisation des microtubules, qui sont perturbées dans la MA. Afin de pouvoir compléter cette liste nous avons mis au point au laboratoire le couplage entre la chromatographie liquide et les spectromètres de masse équipés d’une source MALDI. Ce couplage nous offre des possibilités d’anlyses supplémentaires (Chiappetta et al. 2010) ainsi qu’une complémentarité d’analyse comparé au montage classique (LC-ESI). Pour comprendre la complémentarité protéique et peptidique de ces deux approches(LC-MALDI et LC-ESI) nous avons étudié différents facteurs phyisco-chimiques pouvant induire une discrimination et une ionisation préférentielle