Caractérisation d'une adhésine de la famille des MSCRAMMs chez ruminococcus gnavus E1
Auteur / Autrice : | Radia Alatou |
Direction : | Michel Fons |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences de la vie et de la santé. Nutrition et sécurité alimentaire. Aspects moléculaires et cellulaires |
Date : | Soutenance en 2010 |
Etablissement(s) : | Aix-Marseille 3 |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Ruminococcus gnavus E1, une bactérie à Gram positif, anaérobie stricte, isolée du microbiote dominant d'un homme sain. Un ORF d'environ 6kb, nommé radA, a été identifié sur le chromosome de la souche E1, à proximité des clusters génétiques impliqués dans la biosynthèse des bactériocines RumA et RumC qui sont actives contre le pathogène Closthdium perfringens. RadA présente de fortes homologies avec des gènes de Staphylococcus aureus, Bacillus cereus et C. Perfingens codant pour des protéines des adhésines de la famille des MSCRAMMs. La partie du gène radA codant pour les 414 acides aminés situés à l'extrémité N-terminale de la protéine putative mature, sans, a été clonée dans le vecteur pGEXT4, exprimée chez Escherichia coli. Les tests réalisés par la méthode ELISA montrent ce fragment de RadA est impliqué dans l'adhésion au collagène de type I. Afin de localiser plus précisément la région responsable de l'adhésion, le fragment du gène radA codant pour les 218 acides aminés localisés à l'extrémité N-terminale de RadA a été clone dans le vecteur pGEXT4 et exprimé chez E. Coli. La protéine fusion GST-RadA218 présente une adhésion au collagène nettement plus forte que RadA414. Ll a été montré par RT-PCR que le gène radA est fortement exprimé in vivo, quand la souche E1 colonise le tube digestif d'animaux monoxéniques, et peu transcrit in vitro. Les expériences complémentaires montrent que radA est largement disséminé chez différentes souches isolées du microbiote dominant de l'Homme du cluster phylogénétique Clostridium coccoides qui comprend l'espèce R. Gnavus. Les résultats suggère que RadA pourrait jouer un rôle important dans la colonisation de l'écosystème digestif