La protéine Précore P22 du virus de l'Hépatite B humaine : adressage vers le cytoplasme et fonctions

par Marion Duriez

Thèse de doctorat en Interactions hôtes agents infectieux

Sous la direction de Jean-Michel Rossignol.

Soutenue en 2009

à Versailles-St Quentin en Yvelines .


  • Résumé

    Plusieurs observations suggèrent que la protéine Précore d’HBV soit impliquée dans l’établissement de l’infection chronique des hépatocytes par le virus de l’Hépatite B humaine. Cette protéine est adressée à la voie de sécrétion, suite au clivage du peptide signal une protéine de 22 kDa nommée P22 est délivrée dans le lumen du RE avant d’être maturée en antigène HBe. Par ailleurs, la présence dans le cytoplasme de protéines de 22 kDa reconnues par les anticorps anti-Précore a été observée. Cependant, cette forme de Précore dite P22 cytoplasmique (P22-Cyto) n’avait pas été caractérisée. Les travaux présentés dans ce manuscrit ont visé à isoler et caractériser P22-Cyto ainsi que le mécanisme permettant son existence, puis à tenter de déterminer la fonction de cette protéine dans la biologie d’HBV. Nous avons montré que P22-Cyto résulte d’un transport rétrograde de la protéine P22 présente dans le RE via la voie ERAD (ER-associated degradation) et qu’un échappement de P22 à la dégradation par le protéasome lui permet d’atteindre le cytoplasme. Nous avons observé que P22 relocalise la protéine chaperon BiP dans le cytoplasme mais que cette relocalisation ne module pas le rôle de BiP dans la réponse à un stress du RE et n’active pas l’UPR (Unfolded protein response). La localisation précise de P22-Cyto dans la cellule a été étudiée par immunofluorescence dans des hépatocytes répliquant HBV. Nous avons montré que P22-Cyto est adressée au centrosome via un domaine CTRS-like qui lui est spécifique. Enfin, nous avons cherché à déterminer si P22-Cyto est impliquée dans la formation de pseudocapsides dépourvues en ARN pré-génomique, qui limiteraient la production virale

  • Titre traduit

    Hepatitis B virus Précore protein : addressing to the cytoplasm and functions


  • Résumé

    Several observations report a role of HBV Precore protein in the establisment of hepatocytes chronic infection. This protein is adressed to the secretory pathway and after signal peptide cleavage, a 22 kDa protein called P22 is released in the ER lumen before to be processed in HBe antigen. Moreover, a 22 kDa protein in the cytoplasm detected by antibodies directed against Precore have been observed. However this Precore protein called cytoplasmic P22 (P22-Cyto) has not been yet characterised. Our goal during this thesis was to isolate and characterize P22-Cyto as well as the mecanism allowing its existence, and then to attempt to understand its fonction in HBV life cycle. We demonstrated that P22-Cyto come from a retrotransport of ER lumenal P22 through ERAD pathway (for ER-associated degradation) and escape from the proteasome degradation to reach the cytoplasm We have shown that the chaperon BiP protein is delocalised into the cytoplasm along with P22 but this relocalisation is not involved in the control of BiP function in the response to an ER-stress and does not induce an UPR (for Unfolded protein response). Intracellular P22-Cyto exact localisation has been observed by immunofluorescence in HBV replicating hepatocytes. We point out that P22-Cyto is adressed to the centrosome through its own specific CTRS-like domain. Finally, we attempt to define if P22-Cyto could be involved in the formation of pseudocapsides devoided of pregenomic RNA, and consequently would reduce viral replication.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (155 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 135-155. Index

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