Charge virale et intégration du génome d'HPV16 au cours de l'histoire naturelle des lésions du col de l'utérus

• Auteur / Autrice : Maëlle Saunier
• Direction : Jean-Luc Prétet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé
• Date : Soutenance en 2009
• Etablissement(s) : Besançon
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Homme, environnement, santé (Besançon2000-2012)

Mots clés

Mots clés contrôlés

PCR (génétique)

Papillomavirus

Col de l'utérus

Résumé

Les Papillomavirus Humains à haut risque (HPV-HR) sont les agents étiologiques du cancer du col de l'utérus. Si une infection par un HPV-HR est nécessaire, elle n'est pas suffisante pour induire des lésions (pré)cancéreuses. Cette infection doit persister avec un même type d'HPV-HR durant plusieurs années pour conduire à l'apparition de lésions précancéreuses, et cette persistance peut être influencée par plusieurs facteurs liés à l'hôte (mise en place des réponses immunitaires), à l'environnement (tabagisme, parité. . . ) ou au virus (génotype, charge virale, intégration virale). Ainsi, la détection d'un HPV-HR, même si elle permet d'identifier les femmes à risque, n'est pas suffisante pour prédire le développement de lésions cancéreuses du col de l'utérus. Il existe un lien étroit entre l'histoire naturelle du cancer du col de l'utérus et l'histoire naturelle de l'infection par HPV. Si l'histoire naturelle des lésions est bien décrite sur le plan histologique et cytologique, l'histoire naturelle de l'infection est encore mal connue. Or une meilleure compréhension de l'histoire de l'infection est nécessaire pour identifier des marqueurs pertinents permettant d'identifier les lésions prévalentes et incidentes du col de l'utérus. Pour mieux comprendre les mécanismes de l'infection, nous avons étudié certains paramètres viraux tels que le génotype, la charge virale et l'intégration de papillomavirus humains. Nous avons souhaité décrire l'évolution des facteurs viraux au cours de l'histoire naturelle des lésions et de définir leur implication dans l'évolution de l'infection vers le cancer du col de l'utérus qui est une conséquence rare de cette infection. Nous avons montré dans une première étude qu'HPV16 était le second génotype le plus prévalent dans les lésions de bas grade en France et que ce génotype pourrait être associé à des lésions de mauvais pronostic. Puis nous avons montré dans 2 études, menées sur 2 sites différents, que la charge virale et l'intégration du génome d'HPV16 étaient corrélées au grade de lésions précancéreuses et cancéreuses du col de l'utérus et que la charge virale permettait d'identifier les lésions prévalentes de haut grade. Par ailleurs, nous avons mené un travail de validation intersites de la technique de PCR temps réel permettant la détermination de la charge virale d'HPV16. Nous avons observé que la technique était robuste et que les variations de charges virales étaient minimes entre les deux sites, sous réserve qu'un soin particulier soit apporté à la conception des gammes d'étalonnage. Enfin, nous avons développé une technique de PCR temps réel duplex permettant la quantification simultanée de l'ADN d'HPV16 et 18 qui sont les génotypes les plus fréquemment retrouvés dans les cancers du col de l'utérus. La comparaison entre les résultats de charge virale obtenus en PCR duplex 16/18 et ceux obtenus en PCR simplex 18, a révélé que la PCR duplex était une méthode précise pour la quantification de l'ADN de ces 2 génotypes.

High-risk Human Papillomavirus (HPV-HR) are etiologic agents of cervical cancer. Even though HR-HPV infection is necessary, it is not sufficient to induce precancerous and cancerous lesions. Indeed, the infection must persist for several years to cause precancerous lesions, and this persistence is modulated by factors linked to the host (immune response setup), to the environment (smoking) and to the virus (genotype, viral load, integration). So even if the detection of an HR-HPV allows the identification of women at risk, it is not sufficient to predict precancerous and cancerous lesion development. Infection natural history is linked with lesion history but if lesion natural history is well described on the histology and cytology side, the infection natural history has been poorly described. Nevertheless, a better understanding of the infection natural history is necessary to identify pertinent markers of prevalent and incident lesions. So we decided to describe viral factors such as genotype, viral loads and integration, and to define their involvement in the evolution of the infection toward cervical cancer. In a first study, we showed that HPV16 is the second most prevalent genotype in low grade lesions in France and that this genotype might be associated with poor pronosis lesions. Then, we showed, in 2 studies performed on 2 sites, that both viral load and integration were correlated with lesion grade, and that viral load may allow the identification of prevalent high grade lesions. In an intersite validation study we showed that variation of viral load measurement between the 2 sites were slight, as long as standards preparation was meticulous. In a last study, we developed a real time duplex PCR allowing the stimultanaous determination of HPV16 and 18 viral loads, which are the most prevalent genotypes in cervical cancers. Comparison between viral loads obtained with this duplex PCR were very close from those obtained with simplex PCR targeting these 2 types, meaning that duplex PCR is a precise method for DNA quantification of HPV16 and 18.