Recherche Avancée

Thèse soutenue

Etude biochimique, structurale et physiologique d’enzymes lipolytiques chez les Mycobactéries

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Auteur / Autrice : Rabeb Dhouib
Direction : Stéphane Canaan
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie moléculaire et biotechnologies
Date : Soutenance en 2009
Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
Ecole(s) doctorale(s) : Ecole Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille)

Résumé

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Les enzymes lipolytiques chez Mycobacterium tuberculosis, l'agent étiologique de la tuberculose, restent peu étudiées malgré leur probable implication dans des fonctions physiologiques essentielles chez ce bacille. La mise à disposition de la séquence du génome de M. Tuberculosis a permis d'identifier les gènes codant ces enzymes chez ce microorganisme. Mon travail de thèse a consisté, dans un premier temps, en la caractérisation biochimique, structurale et fonctionnelle d'une enzyme lipolytique potentielle, la Rv0183, chez M. Tuberculosis. Nous avons démontré que la Rv0183 est une monoacylglycérol lipase localisée non seulement dans l'enveloppe mycobactérienne mais aussi dans le milieu de culture. Le rôle physiologique de la Rv0183 a été extrapolé grâce à l'étude de son homologue chez M. Smegmatis, la MSMEG_0220. Cette protéine, en plus de son implication dans l'hydrolyse de lipides exogènes, semble jouer un rôle structural au niveau de l'enveloppe mycobactérienne. Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés à la caractérisation de deux autres protéines secrétées par M. Tuberculosis apparentées à la famille des cutinases : la Rv1984c et la Rv3452. Bien qu'elles présentent une identité de séquence de 50%, l'étude des propriétés cinétiques de ces protéines a montré une divergence dans leur spécificité de substrat. Si la Rv1984c pourrait être définie comme une lipase, la Rv3452 est une phospholipase de type A2. Etant secrétées par M. Tuberculosis, une évaluation de la cytotoxicité de ces protéines a montré que contrairement à la Rv1984c, la Rv3452 était capable d'induire la lyse de macrophages suggérant une implication de cette protéine dans la virulence de M. Tuberculosis. Un dernier aspect de mon travail a été d'étudier la lipolyse in situ chez M. Smegmatis. En utilisant la microscopie de florescence en temps réel, nous avons suivi, l'hydrolyse des réserves intracytoplasmiques chez ce bacille placé en milieu appauvri. Ce phénomène a été bloqué par la la tétrahydrolipstatine confirmant l'implication d'enzymes lipolytiques